Separation of ascorbic acid and vitamin B complexes – essentially required nutrients

Význam tématu

Ve výzkumu doplňků stravy a biologických vzorků hrají vodou rozpustné vitaminy klíčovou roli kvůli své rychlé distribuci a omezené skladovací kapacitě v organismu. Rychlá, citlivá a spolehlivá analýza vitaminu C a komplexu B-vitaminů je zásadní pro kontrolu kvality doplňků i pro laboratorní výzkum, protože tyto látky zahrnují široké spektrum chemických vlastností (zásadité, kyselé i neutrální formy) a různou stabilitu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentovaného postupu bylo vyvinout ultrarychlou vysokotlakou kapalinovou chromatografii (UHPLC) s detekcí DAD pro rychlé oddělení a kvantifikaci osmi vodou rozpustných vitaminů (C a vitaminy B1, B2, B3, B5, B6, B7, B9, B12) během méně než deseti minut. Práce zahrnuje úpravu mobilní fáze, optimalizaci pH a implementaci přepínání vlnové délky pro zvýšení citlivosti na vitamin B12.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda:

• Příprava vzorku: ředění do 20 mmol/l roztoku dihydrogenfosforečnanu draselného pH 3.0, filtrace 0,45 μm stříkačkovým filtrem.
• Kolonová separace: C18 kolona Eurospher II (150×3 mm, částice 3 μm) při 30 °C.
• Gradient: 0–30 % acetonitrilu během 8,5 min, doba běhu 20 min, tok 1 ml/min.
• Detekce: DAD, přepínání vlnové délky z 270 nm na 220 nm v čase 5,5 min pro lepší citlivost na cyanokobalamin.

Instrumentace:

• UHPLC systém AZURA® (pumpa P6.1L LPG, autosampler AS 6.1L, DAD 6.1L s LightGuide buňkou, termostat CT 2.1)
• Software OpenLAB EZChrom Edition

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila oddělení a kvantifikaci sedmi vitaminů s dosažením LOQ v rozmezí 66 µg/l (kyselina askorbová) až 2183 µg/l (pyridoxin). Cyanokobalamin vykázal optimální citlivost při detekci na 220 nm. Při testech nebyla folová kyselina stabilní za použitých podmínek. Chromatogram standardního mixu ukázal baseline separaci všech analyzovaných látek v rámci deseti minut.

Přínosy a praktické využití metody

Tento postup nabízí:

• Rychlou analýzu (<10 min) pro vysokou propustnost vzorků ve výzkumných i komerčních laboratořích.
• Vysokou citlivost zejména pro vitamin B12 díky přepínání detekční vlnové délky.
• Univerzálnost při analýze dietních doplňků, potravinových matic i biolátek.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj zahrnující:

• Automatickou přípravu vzorků a online SPE pro snížení manuální práce.
• Rozšíření spektra analyzovaných vitaminů a metabolitů díky hyphenovaným technikám (UHPLC-MS).
• Adaptaci metody na mikrofluidní platformy a rychlé screeningové testy.

Závěr

Navržená UHPLC-DAD metoda představuje robustní a efektivní nástroj pro kvalitativní i kvantitativní stanovení vitaminu C a kompletního B-komplexu. Je vhodná pro rutinní kontrolu kvality, výzkum a vývoj doplňků stravy.

Reference

1. Weiz S., Böttcher J., Monks K. Separation of ascorbic acid and vitamin B complexes, KNAUER Wissenschaftliche Geräte GmbH.