Comparison of two column sets for antibody purification in an automated two step purification process

Význam tématu

Antigenně specifické protilátky jsou klíčové v biotechnologii a farmaceutickém průmyslu pro diagnostiku, terapii i výzkum. Zajištění vysoké čistoty a výtěžku těchto molekul je nezbytné pro spolehlivé výsledky a bezpečnost finálního produktu. Automatizovaná dvoustupňová chromatografická metoda minimalizuje manuální zásahy, zvyšuje reprodukovatelnost a zkracuje dobu analýzy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo porovnat dvě odlišné sady chromatografických kolonek (vendor X vs. Sepapure) v rámci automatizovaného dvoustupňového čištění protilátek na systému AZURA® Bio purification 50. Posuzovány byly kapacita, výtěžek a čistota izolovaných imunoglobulinů po affinitní fázi a následné výměně pufru na desaltingové koloně.

Použitá metodika a instrumentace

Analytický postup zahrnoval první krok protein A affiní chromatografie následovaný sekundárním krokem desaltace k výměně pufru. Pracovní přístrojová sestava:

• Pumpa AZURA P6.1L s kovovou hlavou HPG, 50 mL
• 2× asistenční modul AZURA ASM 2.1L se dvěma 6port/2poz ventily a jedna UVD 2.1S detekční jednotka
• Vodič průtoku, monitor vodivosti AZURA CM 2.1S
• Frakční kolektor Foxy R1

Kolonky:

• vendor X Protein A FF 1 mL + vendor X Desalting 5 mL
• Sepapure Protein A FF 1 mL + Sepapure Desalting 5 mL

Pufry:

• Eluent A: 20 mM fosfátový pufr, pH 7,4
• Eluent B: 0,1 M glycin-HCl, pH 2,7

Parametry:

• Průtok: 1 mL/min pro affinitu, 5 mL/min pro desalting
• Injekční objem: 100 µL rekonstituované lidské plazmy
• Detekce UV při 280 nm, záznam vodivosti

Hlavní výsledky a diskuse

Obě sady kolonek poskytly téměř shodné výtěžky a čistoty:

• vendor X: 0,37 ± 0,05 mg IgG
• Sepapure: 0,41 ± 0,10 mg IgG

SDS-PAGE analýza potvrdila vysokou čistotu (> 95 %) v podobě dvou pásem odpovídajících těžkému a lehkému řetězci. Chromatogramy prokázaly konzistentní profil dvou piků (affinitní eluce a následné desaltingové eluce) bez významných rozdílů mezi materiály.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaný postup odstraňuje potřebu manuálních přenosů mezi afinitní a desaltační fází, čímž snižuje riziko kontaminace a chyby operátora. Metoda se snadno přizpůsobí jiným typům resinů a protokolům, což usnadňuje validaci a rutinní nasazení v QA/QC a výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření automatizovaných systémů o online analytické moduly (MS, DLS), integrace kontinuálního toku a high-throughput formátu, propojení s laboratorními informačními systémy a miniaturizace pro screeningové aplikace.

Závěr

Systém AZURA® Bio purification 50 umožnil plně automatizované dvoustupňové čištění protilátek srovnatelné výtěžky i čistotou pro obě testované sad kolonek. Výsledky potvrzují vhodnost metody pro rutinní izolaci IgG s vysokou reprodukovatelností a minimální potřebou obsluhy.

Reference

V dokumentu nebyly uvedeny žádné literární zdroje.