Quantification of steroids in human serum by TurboFlow online sample cleanup using a Transcend VTLX-1 UHPLC system

Význam tématu

Steroidní hormony v biologických matricích jsou klíčové pro diagnostiku endokrinních a metabolických poruch. LC-MS/MS spojuje vysokou specifičnost a citlivost s nízkým objemem vzorku, avšak online čištění vzorku a prostorové nároky přístrojů bývají praktickou překážkou v klinických a výzkumných laboratořích.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl vyvinout a porovnat analytickou metodu pro kvantifikaci osmi steroidů v lidské séru s využitím TurboFlow online čištění na novém UHPLC systému Transcend VTLX-1 a jejím předchůdci Transcend TLX-1. Systémy byly připojeny ke stejné triple kvadrupólové hmotnostní spektrometrii TSQ Altis a vyhodnoceny z hlediska chromatografie, kvantifikačních limitů, přesnosti a vnitrodenní preciznosti.

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC systémy: Transcend VTLX-1 a TLX-1 s možností TurboFlow online čištění.
• Sdaty: Cyclone-P TurboFlow kolona 0,5×50 mm, Accucore Biphenyl analytická kolona 50×2,1 mm, mobilní fáze voda/methanol s 0,2 mM amonným fluoridem.
• MS detekce: TSQ Altis s HESI-II zdrojem, pozitivní ionizace, SRM režim, Q1 = 0,7 FWHM, Q3 = 1,2 FWHM, cyklus 0,3 s.
• Příprava vzorku: proteinová precipitace metanolem s izotopovými interními standardy, centrifugace, autosampler při 10 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

• Systém VTLX-1 prokázal ostřejší a symetričtější chromatografické píky pro většinu analyzovaných steroidů díky optimalizovanému fluidickému designu a sníženému dead volume.
• DHEAS nebyl na TLX-1 metodě detekovatelný bez rozsáhlé optimalizace, na VTLX-1 se objevil s vysokou intenzitou a symetrií.
• Lineární kalibrační křivky s vážením 1/x dosáhly korelačních faktorů R2 ≥ 0,9995 na obou systémech.
• Přesnost (bias) kontrolních vzorků se pohybovala v rozmezí -6,2 % až 5,6 %, vnitrodenní preciznost (%CV) byla vždy pod 2,3 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje kvantifikaci osmi steroidů během pouhých pěti minut s minimální předúpravou. Kompaktní uspořádání VTLX-1 a integrované online čištění zrychlují rutinní analýzy, snižují riziko kontaminace a zvyšují reprodukovatelnost výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další miniaturizace a integrace automatizovaných přípravných procesů pro vyšší propustnost a menší spotřebu reagencií.
• Rozšíření aplikací na širší spektrum lipidomiky a metabolomiky s využitím online SPE a datově řízených metod.
• Vývoj přenosných mini-UHPLC/MS systémů pro bodové diagnostické využití v terénu.

Závěr

Srovnání Transcend VTLX-1 s TLX-1 ukázalo, že VTLX-1 poskytuje lepší chromatografickou výkonnost, vyšší citlivost a zachovává nebo zlepšuje přesnost a precizi. Díky menší stopě a robustnímu online čištění je vhodný pro vysoce náročné rutinní i výzkumné aplikace v analýze steroidů.