Analyzing Iohexol by Compendial Method Produces Excellent Precision with Shallow Gradients Using an Agilent 1260 Infinity III LC

Význam tématu

Compendialní metody zajišťují standardizovanou kvalitu a spolehlivost farmaceutických analýz. Měření retenčních časů s vysokou přesností je nezbytné pro rozlišení aktivních látek od nečistot. Analýza iohexolu, polarizovaného kontrastního činidla, je náročná kvůli špatné retenci na klasických C18 fázích a požadavkům na mělké gradienty.

Cíle a přehled studie / článku

Studie demonstruje schopnost přístroje Agilent 1260 Infinity III LC splnit systémovou vhodnost kompendiálního postupu pro analýzu iohexolu podle evropské farmakopeje. Následně byla metoda převedena na UHPLC podmínky s cílem zkrátit dobu analýzy a snížit spotřebu rozpouštědel při zachování požadavků farmakopeje.

Použitá metodika a instrumentace

Separační podmínky vycházely z Ph. Eur.: gradient 0,2 % B za minutu v rozpětí 1–13 % acetonitrilu během 60 min při 25 °C, detekce UV 254 nm, injekce 10 µl, průtok 1 mL/min.
Instrumentace:

• Agilent InfinityLab Assist Upgrade (G7178A)
• Agilent 1260 Infinity III Quaternary Pump (G7111B)
• Agilent 1260 Infinity III Vialsampler s integrovanou kolonkou (G7129A)
• Agilent 1260 Infinity III Variable Wavelength Detector (G7114A)
• Kolony ZORBAX Eclipse Plus C18 4,6×250 mm 5 µm a Poroshell 120 Aq-C18 3×150 mm 2,7 µm
• Software Agilent OpenLab CDS verze 2.7

Rozpouštědla: acetonitril Gradient Grade, ultrapure voda; vzorky v 1 mM NaOH.

Hlavní výsledky a diskuse

Kompendiální metoda prokázala v osmi replikátech RSD retenčních časů ≤ 0,083 % a rozlišení mezi nečistotou A a iohexolem 5,5 EP, splňující požadavky Ph. Eur. Optimalizovaná metoda s Poroshell Aq-C18 kolonkou, průtokem 0,788 mL/min a gradientem zkracujícím fázi na 19,44 min zachovala rozlišení (> 6,8 EP), zvýšila preciznost retence (RSD ≤ 0,044 %) a zkrátila celkovou dobu analýzy na 27 min.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizace přináší:

• Snížení doby analýzy o 64 % a spotřeby rozpouštědel o 71 %
• Vysokou opakovatelnost měření a stabilní retence i při mělkém gradientu
• Možnost ověření a adaptace kompendiálních procedur na UHPLC
• Podpora udržitelnosti a úspory nákladů v QA/QC laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na:

• Rozšíření UHPLC metod pro polarizované látky
• Zavádění green chemistry principů s minimální spotřebou
• Pokročilé pumpy pro extrémně mělké gradienty
• Automatizovanou kontrolu systémové vhodnosti a samonastavení metod

Závěr

Agilent 1260 Infinity III LC potvrdil vysokou stabilitu a přesnost i při kompendiálních mělkých gradientech. Optimalizovaná UHPLC metoda s Poroshell 120 Aq-C18 umožnila významnou úsporu času a rozpouštědel bez kompromisu na kvalitě separace.

Reference

• The United States Pharmacopoeia. General chapter <1226> Verification of Compendial Procedures; 2019.
• The European Pharmacopoeia 11.0, Iohexol 01/2017:1114.
• National Drug Code Directory, United States Food and Drug Administration.
• The United States Pharmacopoeia. General chapter <621> Chromatography; 2023.
• The European Pharmacopoeia 11.0, Chapter 2.2.46, Chromatographic Separation Techniques.
• Schipperges S, Naegele E. Reduce the Cost per Injection for Your USP Compendial Method; Agilent Technologies, 2023.
• Fu R, Wei T. Analysis of Polar Compounds Using an Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 Column; Agilent Technologies, 2022.