Rapid Mixed-Mode SPE Method Development of Tyrosine Kinase Inhibitor Oncology Pharmaceuticals Oasis™ Method Development Plate

Význam tématu

Metoda smíšené SPE kombinuje reverzní fázi a iontovou výměnu pro účinné vyčištění vzorků a selektivní extrakci malých molekul ze složitých matric. V bioanalytické kvantifikaci onkologických tyrozinkinázových inhibitorů v plazmě zkracuje dobu vývoje metod, zvyšuje reprodukovatelnost a umožňuje spolehlivou analýzu nízkých koncentrací látek.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo ukázat rychlý screening metod smíšené SPE pomocí Oasis µElution Method Development Plate se čtyřmi sorbenty (MCX, WAX, WCX, MAX) pro extrakci blokbusterových onkologických TKI z plazmy. Studie sledovala recovey ≥70 %, matrix efekty ≤15 %, lineární kvantifikaci (R2≥0,99) a přesnost ≥85 % pomocí konečného MCX SPE a LC-MS/MS analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

• Sample preparation: Oasis µElution Method Development Plate se třemi řadami sorbentů MCX, WAX, WCX a MAX a protokol 2×4 pro rychlý screening.
• Konečná extrakce: Oasis MCX 96-well µElution Plate, 300 µL plazmy přepředpřipravené 1 : 1 s 4 % H3PO4, wash 200 µL 2 % HCOOH, eluce dvěma 25 µL frakcemi metanolu, ředění 50 µL vody.
• UPLC: ACQUITY I-Class Plus, kolona CSH C18 2,1×30 mm, 1,7 µm, 45 °C, MP A 0,1 % HCOOH ve vodě, MP B 0,1 % HCOOH v acetonitrilu, gradient doba 3 min, injekce 10 µL.
• MS: Xevo TQ-XS, ESI, MRM, kapilární napětí 0,75 kV, desolvace 500 °C, flow 1100 L/h, MassLynx v.4.1 a TargetLynx.

Hlavní výsledky a diskuse

• Screening ukázal nejlepší recovey ≥70 % a matrix efekty ≤15 % u sorbentu MCX v neutrální frakci.
• Výjimek bylo u quizartinibu (recovery <70 %), což bylo připisováno vysokému proteinovému vázání, doporučeno úpravy předúpravy.
• Byl dosažen lineární kvantifikace R2≥0,99, LLOQ 0,91 ng/mL, ULOQ až 1000 ng/mL v závislosti na analyzu, přesnost ±15 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metodika výrazně zkracuje čas vývoje extrakce, umožňuje simultánní test čtyř sorbentů, zvyšuje throughput a spolehlivost kvantifikace TKI v klinických studiích a QA/QC protokolech.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorku a integrace do robotických platforem.
• Optimalizace pro potlačení proteinového vázání a rozšíření na další biologické matrix.
• Vývoj nových sorbentů a miniaturizace pro ultra-rychlé vyšetřovací protokoly.
• Pokročilá datová analýza a umělá inteligence pro návrh extrakčních postupů.

Závěr

Smíšená SPE s využitím Oasis MCX sorbentu prokázala vysokou recovey, nízké matrix efekty a spolehlivou kvantifikaci onkologických TKI v plazmě. Metoda nabízí rychlý screening sorbentů a robustní bioanalytické výsledky vhodné pro preklinické a klinické aplikace.

Reference

1. Williams RE, Leatherwood HM. Top 200 Small Molecule Drugs by Retail Sales in 2023. 2024.
2. DrugBank Online. DB00480. 2024.
3. Chambers E, Diehl D, Mazzeo J. Simple and Fast SPE-UPLC-MS-MS Method for an Allergy Tablet Mixture of Acids and Bases. Waters Application Note.
4. Danaceau JP, Trudeau ME. A Simple, Broadly Applicable Automated Bioanalytical Sample Preparation Strategy for LC-MS Quantification of Apixaban. Waters Application Note. 2023.
5. Rahim F, VanTran, Trudeau ME. Simple, Fast and Selective, Bioanalytical Sample Extraction for the Therapeutic Drug Lenalidomide From Plasma Using Oasis MCX SPE. Waters Application Note. 2023.