Rapid Mixed-Mode SPE Method Development Using the Oasis® μElution Sorbent Selection Plate

Význam tématu

Mixed-mode pevná fáze extrakce (MM-SPE) představuje univerzální přístup k výběru a izolaci širokého spektra analytů (kyselin, zásad i neutrálních látek) z biologických matic. Vývoj efektivní MM-SPE metody zpravidla vyžaduje časově náročné testování jednotlivých sorbentů a protokolů. Použití Oasis Method Development 96-well µElution destičky umožňuje paralelní screening čtyř klíčových chemistrií (MCX, WAX, WCX, MAX) v jediném experimentu a dramaticky urychluje optimalizaci extrakční procedury pro farmaceutika jako abrocitinib a enzalutamid.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo demonstrovat rychlý a jednoduchý postup pro vývoj mixed-mode SPE metod pomocí µElution destičky s následujícími body:

• Paralelní test sorbentů MCX, WAX, WCX a MAX.
• Vyhodnocení extrakční účinnosti pro dvě farmaceutické sloučeniny: abrocitinib (zásaditý charakter) a enzalutamid (neutrální charakter).
• Minimalizace počtu protokolů – pouhé dva eluce pro test neutral-vs-mixed frakcí.

Použitá metodika a instrumentace

• Oasis Method Development 96-well µElution Plate se čtyřmi sorbenty: MCX (silně kationtově modifikovaný), WAX (slabě kationtový), WCX (slabě aniontový) a MAX (silně aniontový).
• Dva elutační protokoly: první pro uvolnění neutrálních a slabě polárních sloučenin (Elute 1), druhý pro kompletní mixed-mode frakci (Elute 2).
• Vzorky: lidská plazma obohacená abrocitinibem a enzalutamidem.
• Detekce: standardní bioanalytická LC-MS/MS platforma (nepodrobeno detailnímu popisu v apli­kačním briefu).

Hlavní výsledky a diskuse

• Abrocitinib dosáhl nejvyššího výtěžku 92 % v první (neutrální) frakci při použití MCX sorbentu.
• Enzalutamid vykázal výtěžek 106 % ve druhé (mixed-mode) frakci, rovněž na MCX sorbentu, což odráží výjimečnou retenci a následnou eluční účinnost.
• Nízko-matrixové efekty z plazmy potvrdily vysokou selektivitu metody, přičemž všechny testované sorbenty poskytly přijatelné profily čistoty extraktu.
• Protokol se ukázal jako robustní, snadno aplikovatelný a škálovatelný pro další projekty bioanalytického výzkumu.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby vývoje SPE metody díky paralelnímu screeningu.
• Možnost rychlé identifikace optimálního sorbentu a eluce pro různé typy analytů.
• Snížení objemu spotřebovaných vzorků a reagencií díky µElution formátu.
• Vysoká repete­tibilita a snadná automatizace pro provozy s vysokou průchodností (high-throughput).

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s automatizovanými robotickými systémy pro kompletní „walk-away“ workflow.
• Využití strojového učení k predikci optimálních sorbentů a elučních podmínek na základě fyzikálně-chemických vlastností analytů.
• Rozšíření metodiky na další biologické matrice (moč, tkáňové extrakty) a škálu terapeutických látek.
• Implementace MS-MS kvantifikace pro validaci a regulované bioanalytické studie.

Závěr

Použití Oasis µElution Method Development Plate s mixed-mode sorbenty umožňuje velmi rychlý, spolehlivý a vysoce selektivní vývoj SPE metod pro bioanalytické cíle. Ukázková aplikace na abrocitinib a enzalutamid potvrdila vysoké výtěžky a nízké matrixové interference, což předurčuje tento přístup pro nasazení v moderních laboratořích zaměřených na farmakokinetiku a toxikologii.

Reference

• Trudeau M., Lee M. Rapid Mixed-Mode SPE Method Development Using the Oasis® µElution Sorbent Selection Plate. Application Brief. Waters Corporation; 2024.