ADLM: LC-MS/MS ANALYSIS OF MABS USING A MONOCLONAL ANTIBODIES QUANTIFICATION KIT – SPOTLIGHT ON INFLIXIMAB

Význam tématu

V léčbě řady imunitně zprostředkovaných onemocnění hrají terapeutické monoklonální protilátky (t-mAb) klíčovou roli. Optimalizace dávkování a monitorování hladin t-mAb v pacientově krvi je zásadní pro maximalizaci účinku a minimalizaci nákladů. Tradiční ligandově vázané testy (LBA) sice poskytují široce používané řešení, ale narážejí na omezenou dynamiku, možnost křížové reaktivity a vysoké náklady při nižším počtu vzorků. Řešení založené na kapalinové chromatografii se tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) v kombinaci s komerčním kitovým protokolem nabízí alternativu s vysokou citlivostí, standardizovaným postupem a snadnou automatizací.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na kvantifikaci protilátky infliximab (IFX) v lidské plazmě pomocí mAbXmise Inflammation Kit (Promise Proteomics) a LC-MS/MS. Hlavní cíle byly:

• Ověřit lineární rozsah a citlivost metody pro IFX od 2 µg/mL do 100 µg/mL.
• Zhodnotit přesnost a reprodukovatelnost na dvou typech hmotnostních spektrometrů (Xevo TQ-XS a Xevo TQ-S micro).
• Analyzovat matrixové efekty a variabilitu na klinických vzorcích.

Použitá metodika

Pro přípravu vzorků se řídilo návodem mAbXmise Kit:

• 20 µL plazmy bylo aplikováno na jímací desku obsahující stabilně značený infliximab.
• Imunochapadlo bylo promyto a protilátka eluována, poté vysušena a opět rozpuštěna.
• Vzorky byly digesovány proteázou CutXmise přes noc.

Separace proběhla na UPLC s gradientem acetonitril/voda/FA během 4,5 minuty. Kvantifikace probíhala ve MRM režimu cíleně na několik tryptických peptidů IFX a jejich stabilně značených ekvivalentů.

Použitá instrumentace

• UPLC: Waters ACQUITY I-Class FL
• Kolona: XSelect Premier HSS T3, 2,1×50 mm, 2,5 µm
• Hmotnostní spektrometry: Xevo TQ-XS a Xevo TQ-S micro (Waters)

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární kalibrace vykázaly koeficient r2 > 0,998 pro každý peptid. Nejvyšší citlivost měla signatura peptidu SIN, následovaná ASQ při dolní hranici kvantifikace 2 µg/mL.
Precision testy na QC úrovních 4 a 25 µg/mL ukázaly celkovou variabilitu ≤9,5 % CV s přesností 95–108 %.
Vyhodnocení matrixových efektů na šesti jedincích prokázalo účinné potlačení interferencí po imunochapadlu. U 29 klinických vzorků se odstraněním peptidu SIN snížila variabilita ze 29 % na 10 %, což odráží jeho náchylnost k deamidaci.

Přínosy a praktické využití metody

• Snížení objemu vzorku a době provedení díky kitovému protokolu.
• Vysoká citlivost a šířka dynamického rozsahu vhodná pro terapeutické monitorování.
• Možnost automatizace a standardizace v klinických laboratořích.
• Alternativa k LBA se sníženým rizikem křížové reaktivity.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na multiplexní kvantifikaci více mAb v jednom běhu.
• Integrace do klinických laboratoří s plnou automatizací přípravy vzorku.
• Vývoj validovaných metod pro regulační schválení.
• Využití ve farmakovigilančních studiích a personalizované medicíně.

Závěr

Kombinace komerčního mAbXmise kitu a LC-MS/MS poskytuje robustní, citlivý a snadno implementovatelný postup pro kvantifikaci infliximabu v lidské plazmě. Metoda vykazuje vynikající linearitu, přesnost a reprodukovatelnost s možností další automatizace v klinické praxi.

Reference

V textu nebyly uvedeny explicitní bibliografické odkazy.