mAbs Testing in Inflammation Using Mass Spectrometry – Combination of mAbXmise™ Kits and XEVO™ TQ Absolute XR Mass Spectrometer

Význam tématu

Monitoring hladin monoklonálních protilátek (mAb) a protilátek proti léčivu (anti-drug antibodies) je zásadní pro personalizaci a optimalizaci terapie pacientů s chronickými zánětlivými onemocněními. LC-MS/MS přináší vysokou specificitu, široký dynamický rozsah a možnost multiplexního sledování více biologik v jednom běhu s nižšími chybovými případy a lepší standardizací mezi laboratořemi.

Cíle a přehled studie / článku

Tento application note představuje celkové workflow pro kvantifikaci čtyř zánětlivých mAb (infliximab, adalimumab, ustekinumab, vedolizumab) a dvou anti-drug antibodies pomocí mAbXmise™ kitů (ITDM2, IADA1) v kombinaci se spektrometrem Xevo TQ Absolute XR. Cílem je nabídnout klinickým laboratořím rychle implementovatelnou, robustní alternativu k imunoanalýzám.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorky: sérum pacientů, kalibrátory a kvalitativní kontroly připravené pomocí kitů ITDM2 a IADA1 (Promise Proteomics).
• Příprava: imunotrápění, štěpení proteázou CutXmise, inkubace při 37 °C přes noc.
• Chromatografie: ACQUITY Premier Peptide CSH C18 kolona (100×2,1 mm, 1,7 µm), gradient 0,1 % HCOOH ve vodě/ACN, doba analýzy 8 min.
• Mass spektrometrie: Xevo TQ Absolute XR v režimu MRM, ionizace ESI+, kapilární napětí 1,0 kV, desolvační teplota 650 °C.
• Software: MassLynx™ 4.2 pro sběr dat, Arigo Biolaboratories pro vyhodnocení kalibračních křivek.

Hlavní výsledky a diskuse

Kvalifikační studie ukázaly lineární kalibrační křivky (r²>0,99) pro mAb v rozsahu 0,5–100 µg/mL a pro anti-drug protilátky 10–400 ng/mL. Limity kvantifikace (LOQ) odpovídají požadavkům klinického TDM. Metoda dosahuje RSD <10 % a přesnosti 90–115 % v testovaných QCs. Ve srovnání s imunoanalýzami byla pozorována dobrá korelace, přičemž LC-MS/MS často odhalil rozdíly v absolutních hodnotách v souladu s literárními údaji.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší specificita díky sledování unikátních peptidových signatur.
• Široký dynamický rozsah a multiplexní analýza více bioterapeutik v jednom běhu.
• Nižší výskyt falešných výsledků a snížené riziko interferencí z matrice.
• Rychlá implementace díky ready-to-use kitům a připraveným metodám na instrumentu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj LC-MS/MS pro terapeutické monitorování nabídne automatizaci přípravy vzorků, rozšíření panelů o nové biologické léčiva a protilátky. Integrace s laboratorními informačními systémy a validace podle mezinárodních standardů povede k širšímu klinickému používání. Možné je rozšíření na další biologika a nastavení vysoce paralelních metod pro personalizovanou medicínu.

Závěr

Prezentované řešení kombinuje jednoduchou přípravu s vysokou analytickou výkonností LC-MS/MS na Xevo TQ Absolute XR. Nabízí klinickým laboratořím robustní a efektivní alternativu k existujícím imunoanalýzám pro TDM monoklonálních protilátek v zánětlivých onemocněních.

Reference

1. Juillerat P et al. Curr Res Pharmacol Drug Discov. 2022;3:100104.
2. Irving PM, Gecse KB. Gastroenterology. 2022;162(5):1512–1524.
3. Gordon H et al. J Crohns Colitis. 2024;18(10):1531–1555.
4. Rubin DT et al. Am J Gastroenterol. 2025;120(6):1187–1224.
5. Lichtenstein GR et al. Am J Gastroenterol. 2025;120(6):1225–1264.
6. Ladwig PM et al. J Mass Spectrom Adv Clin Lab. 2024;32:24–30.
7. Marin C et al. Pharmaceuticals. 2021;14(8):796.
8. Tron C et al. Bioanalysis. 2022;14(11):831–844.
9. Hoofnagle AN, Wener MH. J Immunol Methods. 2009;347(1–2):3–11.
10. Jourdil JF et al. Ther Drug Monit. 2018;40(4):417–424.
11. Ladwig PM et al. Clin Vaccine Immunol. 2017;24(5):e00545-16.
12. Clarke WT et al. Inflamm Bowel Dis. 2019;25(11):e143–e145.
13. Willrich MAV et al. J Appl Lab Med. 2018;2(6):893–903.