METHOD MODERNIZATION OF COMPENDIAL METHODS USING USP <621> WITH A NEXT-GENERATION HPLC SYSTEM

Význam tématu

Modernizace farmakopejních HPLC metod je klíčová pro zvýšení efektivity, přesnosti a rychlosti analýz bioterapeutik.
Regulační pokyny USP <621> umožňují využití nových systémů s menšími částicemi a vyšším tlakem, což vede k výraznému zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby rozpouštědel a vzorků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo porovnat výkon tradičního HPLC podle metod USP <129> a <121.1> na starším systému s modernizovaným přístupem na platformě Alliance iS Bio HPLC System.
Studie se zaměřila na:

• Analýzu variant monoklonálních protilátek (SEC).
• Mapování peptidů z inzulinu (RPLC).
• Posouzení zkrácení doby běhu, rozlišení a spotřeby rozpouštědel.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnovala škálování podle doporučení USP <621> a porovnání:

• Legacy HPLC system vs. Alliance iS Bio HPLC System.
• Kolon SEC: BioSuite Diol (7,8×300 mm, 5 µm) vs. XBridge Premier Protein SEC (7,8×150 mm a 4,6×150 mm, 2,5 µm).
• Peptidová chromatografie: XSelect Peptide CSH C18 (4,6×100 mm, 5 µm) vs. XSelect Premier Peptide CSH C18 (4,6×50 mm, 2,5 µm).
• Mobilní fáze, tok a injekční objemy přizpůsobené moderním kolonám.

Hlavní výsledky a diskuse

Zkrácení doby analýzy SEC z 30 na 7,5 minuty (4× rychleji) a snížení spotřeby rozpouštědel a vzorku až 6×.
Rozlišení nízkomolekulárních nečistot vzrostlo díky vyšší účinnosti menších částic.
Peptidové mapování inzulinu bylo dokončeno za 7,5 minuty místo 50 minut, přičemž se zachovala přesnost a opakovatelnost oblasti plochy a retence.

Přínosy a praktické využití metody

Modernizované metody přinášejí:

• Výrazné zkrácení doby analýzy v QC laboratořích.
• Snížení spotřeby drahých chemikálií a vzorků.
• Zlepšení rozlišení kritických párů v monoklonálních protilátkách i peptidových mapách.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší adopce systémů s vyšší tlakovou odolností a menšími částicemi.
Integrace automatizovaných workflow a inline monitoring pro zvýšení produktivity.
Vývoj kolon s povrchovými úpravami pro specifické aplikace bioterapeutik a peptidů.

Závěr

Studie potvrdila, že modernizace farmakopejních metod pomocí Alliance iS Bio HPLC System a menších částic přináší významné výhody v rychlosti, rozlišení a nákladech.
Implementace těchto úprav do rutinní praxe podpoří efektivitu QC analýz bioterapeutik.

Reference

1. USP. Chromatography <621>. In: USP‐NF. Rockville, MD: USP; Dec 1, 2022.
2. USP. Physicochemical Analytical Procedures for Insulins <121.1>. In: USP‐NF. Rockville, MD: USP; Dec 1, 2016.
3. Bigos P, Birdsall RE, Nyholm K. Modernizing Compendial SEC Methods for Biotherapeutics Using the Alliance iS Bio HPLC System. Waters Application Note. April 2024. 720008290EN.
4. Han D, Birdsall RE, Nyholm K. Leveraging the Alliance iS Bio HPLC System as a Modern HPLC for Peptide Drug Substances Analysis in QC Environments. Waters Application Note. May 2024. 720008345EN.