Quantitation of N-Nitroso Nebivolol in Nebivolol Tablet Formulation

Význam tématu

Nitrosaminy představují genotoxické nečistoty ve farmaceutických přípravcích a jejich důsledná kontrola je kritická pro zajištění bezpečnosti léčiv. Vzhledem k přísným limitům stanoveným regulačními úřady je nutné vyvinout citlivé a selektivní analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit metodiku pro kvantifikaci N-Nitroso Nebivololu (NDSRI) v tabletkách s obsahem 20 mg Nebivololu. Metoda kombinuje vysokovýkonné kapalinové dělení (LC) s triple kvadrupólovou hmotnostní spektrometrií (TQ MS) za použití optimalizace v softwaru MassHunter.

Použitá instrumentace

Agilent 1290 Infinity II LC systém s modulovým uspořádáním (vysokorychlostní pumpa, multisampler, multicolumn termostat, DAD detektor) ve spojení s Agilent 6495D triple kvadrupólovým LC/MS/MS vybaveným AJS ionizačním zdrojem.

Použitá metodika

• Příprava standardních a kalibračních roztoků: 13bodová kalibrace 5 pg/mL až 50 ng/mL
• Extrakce tablet: rozemletí, vortex, rotospin a odstředění, finální ředění v acetonitril:voda 1:1
• Chromatografie: kolona Pursuit XRs Diphenyl 150×3 mm, gradientní eluce (1 mM NH4CF3COO 0,004 % HCOOH vs. methanol), průtok 0,5 mL/min, teplota 40 °C
• Detekce: režim multiple reaction monitoring (MRM) s optimalizovanými přechody (m/z 435.2→254.0)

Hlavní výsledky a diskuse

• Výborné chromatografické rozlišení API a nitrosaminy (cca 10 minut)
• LOD 2 pg/mL, LOQ 5 pg/mL s S/N >20:1 (LOD) a >50:1 (LOQ)
• Linearita kalibrace (5 pg/mL–50 ng/mL) s regresním koeficientem R2 >0.997
• Recovery 116,8 % (API), 108,3 % (placebo), 111,8 % (tablety) při spiku 200 pg/mL
• Reprodukovatelnost LOQ: %RSD area 3,1 % (n=6)

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje robustní, vysoce citlivé stanovení N-Nitroso Nebivololu v hotových formách, splňuje požadavky FDA pro kontrolu nitrosaminů a je vhodná pro rutinní QA/QC v farmaceutickém prostředí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metodiky na detekci dalších nitrosaminů v různých farmaceutických matricích, integrace automatizovaných vzorkovačů, vývoj vysokoprothrough těchto přechodů a nasazení pokročilých softwarových nástrojů pro rychlejší validaci.

Závěr

Vyvinutá LC/TQ MS metoda je vysoce selektivní, citlivá a reprodukovatelná pro kvantifikaci N-Nitroso Nebivololu v tabletách. Splňuje regulační limity a nabídne farmaceutickému průmyslu spolehlivý nástroj pro monitorování genotoxických nečistot.

Reference

1. Prasanth J Banerjee S Vyas S Determination of Genotoxic Nitrosamine Impurity in Bumetanide API and Tablets Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC MS Application note 5994-2967EN 2020
2. Wu L Bertram L Chan SA Determination of Nitrosamine Impurities Using the Agilent 6475 Triple Quadrupole LC MS System Application note 5994-5919EN 2023