Maximize Your Resources and Simplify Scale-up with AdvanceBio Oligonucleotide Columns

Význam tématu

Ion-pair reverzní fáze chromatografie umožňuje účinnou analýzu a purifikaci syntetických oligonukleotidů.
Rostoucí poptávka v biofarmaceutickém výzkumu a výrobě klade nároky na vysokou rozlišovací schopnost, výtěžnost a škálovatelnost metod.

Cíle a přehled studie

Cílem práce je porovnat výkonnost kolony Agilent AdvanceBio Oligonucleotide (4 µm, superficially porous) se sloupcem Waters XBridge BEH C18 OBD (5 µm, fully porous) v analytickém i semipreparativním měřítku.
Hodnocena byla chromatografická účinnost, výtěžnost a čistota při purifikaci krudového 22-mer RNA.

Použitá metodika a instrumentace

Analytické a semipreparativní běhy byly provedeny podle dvou gradientních metod:

• Metoda 1 (Agilent): konstantní koncentrace TEAA, eluent B obsahuje 90 % acetonitrilu.
• Metoda 2 (Waters): proměnná koncentrace iontového páru, eluent B obsahuje 20 % acetonitrilu.

Kolony:

• Agilent AdvanceBio Oligonucleotide, 4.6 × 150 mm, 2.7 a 4 µm; semipreparativně 10 × 150 mm, 4 µm.
• Waters XBridge BEH C18 OBD, 4.6 × 150 mm, 5 µm; semipreparativně 10 × 150 mm, 5 µm.

Instrumentace:

• Agilent 1290 Infinity II (pumpa G7120A, multisampler G7167B, multikolonový termostat G7116B, DAD G7117C, frakční kolektor G5664A).

Hlavní výsledky a diskuse

Kolona AdvanceBio Oligonucleotide vykázala vyšší chromatografickou účinnost a lepší rozlišení ve srovnání se sloupcem Waters XBridge BEH C18 OBD při stejném zatížení.
Analyticky došlo ke zvýšení citlivosti a čistoty separace blízkých nečistot.
Semipreparativní purifikace 3,2 mg vzorku přinesla více frakcí s vyšší čistotou a výtěžností u AdvanceBio.
Metoda 1 s vysokým obsahem acetonitrilu zajistila důkladné promytí kolony a minimalizaci carry-over.

Přínosy a praktické využití metody

Superficially porous částice zvyšují účinnost separace a kapacitu stanovení.
Jednotná platforma umožňuje plynulé škálování od analytického po preparativní režim při minimálních obměnách instrumentace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj pokročilých polymerních a hybridních částic optimalizovaných pro oligonukleotidy.
Integrace s HPLC/MS systémy a automatizovanými frakčními kolektory pro zvýšení throughputu.
Aplikace v GMP prostředí a masové výrobě léčebných oligonukleotidů.

Závěr

Agilent AdvanceBio Oligonucleotide kolony nabízejí lepší separaci, vyšší citlivost a výtěžnost při purifikaci syntetických oligonukleotidů.
Systém Agilent 1290 Infinity II umožňuje snadné přechody mezi měřítky a zaručuje reprodukovatelné výsledky.