A specialized method for high sensitivity with the Whisper Zoom 20 samples per day method

Význam tématu

Rychlá proteomická analýza s vysokou citlivostí je klíčová pro biologický výzkum a klinické aplikace. Metoda Whisper Zoom 20 vzorků/den představuje optimalizované chromatografické uspořádání pro efektivní separaci komplexních směsí proteinových peptidů bez kompromisu na kvalitě dat.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyhodnotit výkonnost metody Whisper Zoom 20 SPD na modelových vzorcích HeLa tryptického digestu o hmotnosti 5 ng. Hlavní parametry zahrnovaly gradient trvající 68 minut, celkový cyklus 72 minut a automatické mytí kolony, umožňující zpracování až 20 vzorků za 24 hodin.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika byla realizována na platformě Evosep One s následujícím nastavením

• Gradientní eluce od 0 do 40 % organické fáze B při průtoku 200 nl/min, následné zvýšení na 450 nl/min pro mytí
• Dvouvrstvé kolony
  • EV1112 Performance (Evosep) při 40 °C s emitorem Captive Spray 10 µm pro Bruker MS
  • Aurora Elite 15 x 75 µm (IonOpticks) při 50 °C pro Thermo MS
• Hmotnostní spektrometrie
  • Bruker timsTOF Pro 2
  • Thermo MS s emitorem Fused Silica 10 µm
• Software Compass Data Analysis pro extrakci diagnostických peptidů a výpočet FWHM a retencí

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza TIC a BPC ukázala čisté chromatogramy s oddělením klíčových peptidů v definovaných retenčních časech. U kolony EV1112 bylo dosaženo FWHM od 6,5 do 12,3 s, u Aurora Elite se rozsah zlepšil na 4,1 až 7,1 s. Reprodukibilita retence mezi deseti opakovanými injekcemi vykázala odchylky pod 0,2 min, což potvrzuje stabilitu metody.

Přínosy a praktické využití metody

Díky optimalizovanému gradientu a robustnímu hardwaru metoda umožňuje vysokou propustnost bez ztráty citlivosti. Je ideální pro rutinní proteomická měření v oblasti výzkumu biomarkerů, QA QC procesů v biotechnologiích a farmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

V dalším vývoji lze očekávat integraci pokročilých AI algoritmů pro real time datovou analýzu, nasazení nových materiálů kolony pro rychlejší eluci a rozšíření throughput až na 50 vzorků/den. Možná je také aplikace v multiplexních kvantitativních protokolech jako DIA.

Závěr

Metoda Whisper Zoom 20 SPD představuje vyvážené řešení mezi vysokou citlivostí, stabilitou a throughput. Dosažené parametrické ukazatele potvrdily její vhodnost pro komplexní proteomické analýzy v různých aplikačních oblastech.

Reference

1. Evosep One Application Note AN-037A 24.06.2024