A specialized method for high sensitivity with the Whisper Zoom 120 samples per day method

Význam tématu

Rychlé a vysoce citlivé chromatograficko-hmotnostní metody hrají klíčovou roli v proteomice a analytické chemii. Zvýšení průtoku a zkrácení gradientu při zachování vysokého rozlišení umožňuje analýzu velkého počtu vzorků s omezenou spotřebou rozpouštědel a času. Metoda Whisper Zoom 120 SPD přináší optimalizované workflow pro analýzu náročných biologických vzorků v režimu vysoké propustnosti.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo představit a ověřit výkon metody Whisper Zoom 120 SPD, která kombinuje krátký gradient (10,3 minuty) s rychlým mycím cyklem (celkový cyklus 12 minut). Studie hodnotí reprodukovatelnost, rozlišení a citlivost na 5 ng HeLa digestu, přičemž sleduje celkový iontový proud (TIC), proud základních špiček (BPC) a extrakci diagnostických peptidů.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika:

• Gradient: lineární od 5 do 40 % mobilní fáze B během 10,3 minuty, následný mycí krok při 1000 nl/min.
• Průtok: ekvilibrace kolony na 1000 nl/min, analytický gradient 200 nl/min.
• Kolona: IonOpticks Aurora Rapid 5×75 µm, provozní teplota 50 °C.
• Vzorek: 5 ng tryptického HeLa digestu, diagnostické peptidy pro posouzení výkonu.

Křížové platformy:

• Evosep One s konfigurací „Set to Zoom“ skriptem.
• MS: Bruker timsTOF Pro 2 a alternativně Thermo MS.
• Software: Compass Data Analysis pro extrakci dat a výpočet FWHM a variability retenčního času.

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza 5 ng HeLa digestu vykázala:

• TIC a BPC ukazují stabilní signál během gradientu a ostré špičky bez ztráty citlivosti.
• Extrahované iontové chromatogramy vybraných peptidů měly šířky špiček (FWHM) v rozmezí ~1,1–1,4 sekundy.
• Retenční časy vybraných peptidů byly reprodukovatelné s nízkou variabilitou napříč 10 opakovanými injekcemi.

Diskuse se zaměřila na optimalizaci průtoku versus rozlišení a na schopnost metody konsistentně identifikovat nízkomolekulární proteiny v tracech.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje vysokou propustnost až 120 vzorků za den, přičemž zachovává citlivost potřebnou pro detekci nízkých koncentrací peptidů. Tento přístup je vhodný pro:

• Vysoce propustné proteomické studie a biomarkerové screeningy.
• Laboratorní QA/QC aplikace v průmyslové analytice.
• Laboratorní workflow s omezenými zdroji vzorku.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření:

• Integrace s datově nezávislou akvizicí (DIA) a ion mobility separací pro hloubkovou proteomiku.
• Automatizované skripty pro rychlou konfiguraci na různých platformách MS.
• Další miniaturizace kolonn a snížení spotřeby rozpouštědel.

Závěr

Metoda Whisper Zoom 120 SPD nabízí rychlý, citlivý a reprodukovatelný přístup k analýze komplexních biologických vzorků. Díky optimalizovanému gradientu a vysokému průtoku lze dosáhnout vysoké propustnosti bez kompromisů v kvalitě dat.

Reference

Studie AN-039A 24/06, Evosep One Whisper Zoom 120 SPD application note