REPLICATING WATER AND FAT-SOLUBLE VITAMINS ANALYSES ON A MODERN HPLC SYSTEM

Význam tématu

Vitamínové doplňky vyžadují přesnou analýzu obsahu kvůli požadavkům na označení etiket. HPLC je základní technika pro kvantifikaci vodou a tukem rozpustných vitamínů. Různorodé chemické vlastnosti vitamínů vyžadují optimalizaci chromatografických podmínek a migraci metod mezi různými systémy je nezbytná pro udržení konzistence výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem je demonstrovat migraci metod pro analýzu vodou rozpustných vitamínů pomocí HILIC a tukem rozpustných vitamínů pomocí normální fáze mezi systémy Alliance 2695 a Alliance iS. Studie porovnává system suitability, retence, RSD a kvantitativní výsledky vůči deklarovaným hodnotám etiket.

Použitá metodika a instrumentace

• Systémy: Waters Alliance 2695 a Alliance iS HPLC s TUV detektorem
• Kolony: XBridge Amide 4,6×250 mm, 3,5 µm; XBridge BEH HILIC 4,6×150 mm, 5 µm; normální fáze kit p/n 205002529
• Podmínky pro vodou rozpustné vitamíny: gradient HILIC s mobilními fázemi A 100 mM acetát amonný pH 5,5, B acetonitril, C voda; průtok 1 mL/min, teplota kolony 30 °C, detekce UV 265 nm
• Podmínky pro tukem rozpustné vitamíny: izokrat 95 % hexan, 5 % ethylacetát s 0,05 % kyseliny octové; průtok 1,3 mL/min, teplota kolony 40 °C, detekce UV 295 nm
• Příprava vzorku: extrakce vodou a ředění acetonitrilem pro vodou rozpustné; extrakce hexanem pro tukem rozpustné

Hlavní výsledky a diskuse

• System suitability: RSD ploch pod 0,2 % a rozlišení USP nad stanovenými mezemi pro obě systémy
• Malé posuny retenčních časů mezi systémy způsobené rozdílnými objemy zpoždění
• Kvantitativní výsledky vůči deklarované hodnotě etiket v rámci ±9 % pro vodou rozpustné vitamíny
• U tukem rozpustných vitamínů shoda měření tokoferolů mezi systémy v rámci 1,2 %

Přínosy a praktické využití metody

• Schopnost migrovat metody mezi HPLC systémy bez úprav metodiky
• Vysoká reprodukovatelnost a přesnost kvantifikace vitamínových doplňků
• Zrychlení validace při přechodu na novou instrumentaci
• Snížení nákladů a zvýšení flexibility laboratorních postupů

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metod na širší spektrum vitamínů a bioaktivních sloučenin
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity
• Automatizace přípravy vzorků a on-line čištění
• Vývoj rychlých chromatografických metod s menším objemem mobilní fáze

Závěr

Metody pro analýzu vodou a tukem rozpustných vitamínů byly úspěšně migrovány z legendárního systému Alliance 2695 na moderní Alliance iS. Oba systémy splnily požadavky system suitability a poskytly srovnatelné kvantitativní výsledky, což potvrzuje možnost hladké přechodné fáze instrumentace v regulovaných laboratořích.

Reference

1. Grumbach ES, Fountain KJ. Comprehensive Guide to HILIC Hydrophilic Interaction Chromatography. Waters Corporation, 2010.
2. Tran K, Handcock P. Analysis of Water-Soluble Vitamins and Caffeine in Beverage and Multivitamin Products by Arc HPLC System With PDA Detection. Waters Application Note 720007357EN, 2021.
3. Waters Corporation. Normal-Phase Separation of Tocopherols with the ACQUITY H-Class System featuring Auto Blend Technology, 720003690EN, 2010.