Replicating Water and Fat-Soluble Vitamins Analyses on a Modern HPLC System

Význam tématu

Populární užívání vitaminových doplňků vyžaduje přesné analytické metody pro ověření shody skutečného obsahu s deklarovanými hodnotami. Vysokovýkonná kapalinová chromatografie (HPLC) je klíčová technika pro robustní stanovení jak vodorozpustných, tak tukorozpustných vitaminů v různých matricích, přičemž migrace metod na moderní přístroje je nezbytná pro zajištění kontinuální kvality a souladu v regulovaných laboratořích.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zaměřila na přenesení existujících HILIC metod pro vodorozpustné vitaminy a normal-phase metod pro tukorozpustné vitaminy z legacy systému Alliance 2695 na novější systém Alliance iS HPLC. Cílem bylo ověřit srovnatelnou separaci standardů a kvantitativní správnost výsledků v doplňcích stravy na obou platformách.

Použitá metodika a instrumentace

Popis přípravy vzorků:

• Vodorozpustné vitaminy: extrakce tablet vodou, centrifugace, ředění acetonitrilem, HILIC gradientní separace.
• Tukorozpustné vitaminy: extrakce multivitaminových tablet práškem v hexanech, HPLC normal-phase analýza.

Instrumentace:

• HPLC systémy: Waters Alliance 2695, Alliance iS HPLC System s TUV detektorem.
• Kolony: XBridge Amide 4,6×250 mm (HILIC), XBridge BEH HILIC 4,6×150 mm, XBridge normal-phase kit.
• Mobilní fáze: HILIC – 100 mM acetát amonný pH 5,5 / acetonitril / voda; Normal-phase – hexany / ethyl acetát / ocet.
• Teploty kolon a vzorků, objemy injekcí a průtoky přizpůsobené pro optimální retenci a rozlišení.

Hlavní výsledky a diskuse

Obě metody byly úspěšně migrovány na nový systém s porovnatelnými chromatogramy a parametry system suitability. Kvantitativní výsledky pro vitaminy B12, kyselinu listovou a tocoferoly odpovídaly deklarovaným hodnotám s odchylkami v řádu jednotek procent mezi systémy.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace moderní platformy HPLC umožňuje:

• Flexibilní přechod mezi HILIC a normal-phase analýzou bez složitých úprav.
• Zkrácení doby přípravy a zajištění konzistence výsledků v regulačním i průmyslovém prostředí.
• Úsporu nákladů spojenou s jednotnou instrumentací pro různé typy vitaminů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj automatizace přípravy vzorků, integrace HPLC s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení citlivosti a selektivity, rozšíření green chromatografie s nízkým odběrem organických rozpouštědel a nasazení inteligentních analytických platforem řízených umělou inteligencí.

Závěr

Studie prokázala, že migrace HILIC a normal-phase metod mezi legacy a moderním HPLC systémem je proveditelná bez kompromisů v kvalitě separace a přesnosti kvantifikace. Alliance iS HPLC System se ukázal jako univerzální a spolehlivá platforma pro analýzu vitaminových doplňků.

Reference

1. Grumbach E.S., Fountain K.J. Comprehensive Guide to HILIC Hydrophilic Interaction Chromatography. Waters Corporation, 2010.
2. Tran K., Handcock P. Analysis of Water-Soluble Vitamins and Caffeine in Beverage and Multivitamin Products by Arc HPLC System With PDA Detection. Waters Application Note 720007357EN, 2021.
3. Waters Corporation Technology Brief. Normal-Phase Separation of Tocopherols with the ACQUITY–Class System featuring Auto Blend Technology, 720003690EN, 2010.