Analysis of Nucleoside and Nucleic Acid Bas

Význam tématu

Analýza nukleosidů a nukleových bází je klíčová pro biochemii, farmaceutický výzkum i kontrolu kvality. Přesná separace a identifikace těchto molekul umožňuje studium genetických procesů, vývoj léčiv i monitorování metabolických drah.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace je ukázat možnost rychlé a spolehlivé separace deseti běžných nukleosidů a nukleových bází za použití reverzní fáze na columně Shim-pack GIST C18. Studie demonstruje optimalizované chromatografické podmínky pro kvalitativní i kvantitativní analýzu.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla použita kapalinová chromatografie v režimu reverzní fáze. Klíčové parametry:

• Kolona Shim-pack GIST C18, 150 × 4,6 mm, 5 µm
• Mobilní fáze: 0,1 M KH2PO4 s 0,2 M NaClO4, pH 2,03 (úprava H3PO4)
• Průtok 1,0 mL/min
• Teplota kolony 40 °C
• Detekce UV při 260 nm
• Objem injekce 1 µL

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila spolehlivou separaci všech deseti testovaných látek: cytosinu, uracilu, guaninu, adeninu, cytidinu, uridinu, thyminu, adenosinu, guanosinu a thymidinu při koncentraci 25 mg/L. Dosahované rozlišení a symetrie píků potvrdily vhodnost zvoleného pufru a kolonových podmínek. Diskuse se zaměřuje na vliv pH mobilní fáze na selektivitu a posun retenčních časů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Rychlou analýzu desítek nukleosidů a bází v jedné injekci
• Vysokou reprodukovatelnost a citlivost detekce
• Jednoduché nastavení a robustní provoz v rutině
• Možnost aplikace v kontrolách kvality, farmaceutickém výzkumu a biochemických laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj směřuje k integraci s hmotnostní spektrometrií pro vzorky s nízkou koncentrací, aplikaci UHPLC pro zkrácení analýzy, automatizaci přípravy vzorků a využití ve vysokoobjemových screeninzích a metabolomických studiích.

Závěr

Optimalizované podmínky na kolonu Shim-pack GIST C18 umožňují spolehlivou a efektivní separaci klíčových nukleosidů a nukleových bází. Metoda je vhodná pro rutinní i výzkumné účely vyžadující rychlou a precizní analýzu.

Reference

• Shimadzu Corporation. Application Note ERAS-1000-0219A: Analysis of Nucleoside and Nucleic Acid Base Using Shim-pack GIST C18. First Edition Dec. 2021, © Shimadzu Corporation 2024.