Scaling and Migration of a Method for Naphazoline Hydrochloride, Pheniramine Maleate and Associated Related Substances to an ACQUITY Arc System

Význam tématu

Analytické metody pro stanovení naphazolin-hydrochloridu a pheniramin-maleátu se často vyvíjejí na kolonkách s velmi malými částicemi (<2 µm) a systémech s nízkou disperzí, které umožňují rychlou a vysoce výkonnou analýzu. Mnohé laboratoře však používají konvenční HPLC se sloupci s většími částicemi (2,5–5 µm). Zajištění ekvivalentních výsledků při převodu metody na tyto systémy je klíčové pro konzistenci výrobku, shodu s předpisy a bezproblémový přechod mezi platformami.

Cíle a přehled studie

Úkolem bylo převést (geometricky škálovat) existující metodu vyvinutou na 1,7 µm kolonce (2,1 × 100 mm) na 2,5 µm kolonu (4,6 × 150 mm) a migrovat ji ze systému ACQUITY UPLC H-Class Plus na ACQUITY Arc. Hodnoceny byly chromatografické parametry, system suitability testy a výsledky stanovení API a vedlejších látek.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrarychlá chromatografie:

• Kolony: 1,7 µm (2,1 × 100 mm) a 2,5 µm (4,6 × 150 mm), stejná chemie fazí
• Systémy: ACQUITY UPLC H-Class Plus (dwell volume 0,4 mL) a ACQUITY Arc (1,1 mL)

Podmínky:

• Mobilní fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě
• Mobilní fáze B: 0,1 % kyseliny mravenčí v methanolu
• Teplota kolony: 42 °C, detekce UV (260 nm), vzorky 10 °C

Geometrické škálování parametrů (průtok, objem injekce, gradient) proběhlo pomocí Waters Columns Calculator. Prokompenzována byla větší objemová prodleva (dwell volume) funkci Gradient StartSmart se zpožděním startu gradientu o 1,2 min.

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografická separace na ACQUITY Arc odpovídala referenčnímu systému: obdobné hodnoty relativních retenčních časů (RRT) a rozlišení (Rs) mezi kritickými páry špiček.
• System suitability: šestinásobná opakovaná injekce standardu (10 µg/mL) vykázala vynikající opakovatelnost retenčního času i plochy.
• Analýza očních roztoků (500 µg/mL pheniramin, 40 µg/mL naphazolin): % recovery API i % impurity vedlejších látek byly ekvivalentní na obou platformách.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje QC laboratořím, které disponují pouze vyšší disperzí HPLC systémy, zachovat rychlou a spolehlivou analýzu zaměřenou na uvedené API a jejich degradanty. Použití funkce automatického posunu gradientu zjednodušuje migraci metod bez manuálních úprav.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšíření škálování a migrace metod pro různé třídy léčiv a složitější chromatografické separace.
• Integrace pokročilých softwarových nástrojů pro prediktivní modelování vlivu extra-column parametrů.
• Využití umělé inteligence a strojového učení pro optimalizaci podmínek bez fyzického testování.

Závěr

Geometrickou škálováním kolony a kompenzací rozdílů v objemu prodlevy bylo úspěšně dosaženo ekvivalentní chromatografické výkonnosti mezi sub-2 µm a 2,5 µm kolonkami na dvou systémech Waters. Výsledky potvrdily konzistenci rozlišení, system suitability a přesnost stanovení API i vedlejších látek, čímž byla potvrzena praktická použitelnost metody v různých laboratorních prostředích.

Reference

1. Dong M.W. Ultrahigh-Pressure Liquid Chromatography, LC-GC North America, 2017.
2. Hong H., McConville P.R. Dwell Volume and Extra-Column Volume White Paper, Waters, 2018.
3. Waters Columns Calculator, Waters Corporation, 2023.
4. Waters Corporation: Protocol for Gradient Delay Measurement, Application Notebook, 2013.