Drug to Antibody Ratio Analysis of Brentuximab Vedotin in Monkey Plasma
Aplikace | 2024 | Agilent TechnologiesInstrumentace
Analýza poměru nálož-léčivo (DAR) pro konjugáty protilátek a léčiv (ADC) je zásadní pro pochopení farmakokinetiky, stability a biologické účinnosti těchto komplexních terapeutik. Přesné stanovení počtu konjugovaných cytotoxických molekul na molekulu protilátky přímo ovlivňuje bezpečnost a účinnost léku v klinických aplikacích.
Cílem studie bylo navrhnout a ověřit plně automatizovaný hybridní postup kombinující ligand binding assay (LBA) a kapalnou chromatografii s hmotnostní spektrometrií (LC/Q-TOF) pro stanovení DAR brentuximabu vedotinu v primátí plazmě pod nativními podmínkami. Workflow využívá platformu AssayMAP Bravo, Agilent 1290 Infinity II Bio LC a AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF.
Procedura zahrnovala imunoadsorpci ADC pomocí biotinylované anti-human Fc protilátky navázané na streptavidinové kartridge v automatizovaném systému AssayMAP Bravo. Po očistě byl intactní ADC eluován za mírných podmínek a separován pomocí velikostně vylučovací chromatografie na koloně Agilent Bio SEC-3 (4.6×150 mm, 3 µm) při 25 °C s mobilem 100 mM octanem amonným (pH 7) isokraticky 0.4 mL/min. Detekce probíhala na Agilent AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF v pozitivním režimu elektrospray s optimalizovanými parametry. Data byla zpracována softwarem MassHunter BioConfirm.
Spektrum intactního ADC pod nativními podmínkami vykazovalo centrální nábojový obal kolem m/z 5804. Dekonvoluce ukázala hlavní klony DAR 2, DAR 4 a DAR 0 s průměrným DAR 2.53. V testu stability v plazmě při 37 °C poklesl průměrný DAR z 2.49 dne 0 na 1.80 po 1 dnu a dále na 1.30 po 3 dnech, přičemž od 3. do 7. dne se hodnota stabilizovala kolem 1.23. Ve vzorcích se objevily rovněž klony DAR 1 a DAR 3, což indikuje postupné uvolňování cytotoxické nálože.
Automatizovaný hybridní přístup zajišťuje vysokou citlivost, specifitu a reprodukovatelnost při minimálním vývojovém čase metody. Postup je univerzálně aplikovatelný na různé ADC a další velké biopolymerní protilátky, podporuje vývoj a kontrolu kvality nových terapeutik.
Očekává se další rozšíření automatizace a integrace s vysokopropustnými platformami, adaptace metodiky pro multiplexní analýzy různých ADC a využití pokročilých datových algoritmů pro přesnější dekonvoluci a kvantifikaci ve složitých biologických maticích.
Použití Agilent AssayMAP Bravo, 1290 Infinity II Bio LC a AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF představuje efektivní řešení pro stanovení DAR pod nativními podmínkami v biologické matrici. Navržený workflow usnadňuje vývoj a validaci metod pro ADC R&D a QC procesy.
LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/TOF
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceAgilent Technologies
Souhrn
Význam tématu
Analýza poměru nálož-léčivo (DAR) pro konjugáty protilátek a léčiv (ADC) je zásadní pro pochopení farmakokinetiky, stability a biologické účinnosti těchto komplexních terapeutik. Přesné stanovení počtu konjugovaných cytotoxických molekul na molekulu protilátky přímo ovlivňuje bezpečnost a účinnost léku v klinických aplikacích.
Cíle a přehled studie
Cílem studie bylo navrhnout a ověřit plně automatizovaný hybridní postup kombinující ligand binding assay (LBA) a kapalnou chromatografii s hmotnostní spektrometrií (LC/Q-TOF) pro stanovení DAR brentuximabu vedotinu v primátí plazmě pod nativními podmínkami. Workflow využívá platformu AssayMAP Bravo, Agilent 1290 Infinity II Bio LC a AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF.
Použitá metodika a instrumentace
Procedura zahrnovala imunoadsorpci ADC pomocí biotinylované anti-human Fc protilátky navázané na streptavidinové kartridge v automatizovaném systému AssayMAP Bravo. Po očistě byl intactní ADC eluován za mírných podmínek a separován pomocí velikostně vylučovací chromatografie na koloně Agilent Bio SEC-3 (4.6×150 mm, 3 µm) při 25 °C s mobilem 100 mM octanem amonným (pH 7) isokraticky 0.4 mL/min. Detekce probíhala na Agilent AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF v pozitivním režimu elektrospray s optimalizovanými parametry. Data byla zpracována softwarem MassHunter BioConfirm.
Hlavní výsledky a diskuse
Spektrum intactního ADC pod nativními podmínkami vykazovalo centrální nábojový obal kolem m/z 5804. Dekonvoluce ukázala hlavní klony DAR 2, DAR 4 a DAR 0 s průměrným DAR 2.53. V testu stability v plazmě při 37 °C poklesl průměrný DAR z 2.49 dne 0 na 1.80 po 1 dnu a dále na 1.30 po 3 dnech, přičemž od 3. do 7. dne se hodnota stabilizovala kolem 1.23. Ve vzorcích se objevily rovněž klony DAR 1 a DAR 3, což indikuje postupné uvolňování cytotoxické nálože.
Přínosy a praktické využití metody
Automatizovaný hybridní přístup zajišťuje vysokou citlivost, specifitu a reprodukovatelnost při minimálním vývojovém čase metody. Postup je univerzálně aplikovatelný na různé ADC a další velké biopolymerní protilátky, podporuje vývoj a kontrolu kvality nových terapeutik.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se další rozšíření automatizace a integrace s vysokopropustnými platformami, adaptace metodiky pro multiplexní analýzy různých ADC a využití pokročilých datových algoritmů pro přesnější dekonvoluci a kvantifikaci ve složitých biologických maticích.
Závěr
Použití Agilent AssayMAP Bravo, 1290 Infinity II Bio LC a AdvanceBio 6545XT LC/Q-TOF představuje efektivní řešení pro stanovení DAR pod nativními podmínkami v biologické matrici. Navržený workflow usnadňuje vývoj a validaci metod pro ADC R&D a QC procesy.
Reference
- Global Market Insights. Antibody Drug Conjugates Market Report, 2023.
- Jenkins R.; Duggan J.; Aubry A.-F. et al. Recommendations for Validation of LC–MS/MS Bioanalytical Methods for Protein Biotherapeutics. AAPS J. 2015, 17(1), 1–16.
- DailyMed: Adcetris (Brentuximab Vedotin) Prescribing Information, 2018.
- European Medicines Agency: Adcetris EPAR, 2018.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Agilent BioHPLC columns Characterization of Antibody-Drug Conjugate Critical Quality Attributes
2026|Agilent Technologies|Brožury a specifikaceAplikace
Agilent BioHPLC columns Characterization of Antibody-Drug Conjugate Critical Quality Attributes Application compendium Contents Introduction3 Featured application notes 2 PLRP-S Polymeric Reversed-Phase Column for LC/MS Separation of mAbs and ADC (5991-7163EN) 5 Intact- and Peptide-Level Characterization of Trastuzumab Emtansine In Vitro…
Klíčová slova
return, returncontents, contentscounts, countsdrug, drugdar, darsirna, sirnamab, mabamu, amuantibody, antibodydeconvoluted, deconvolutedconjugates, conjugatesbrentuximab, brentuximabadc, adcintact, intactmass
Assessing Protein and Payload Stability of Antibody Drug Conjugate Brentuximab Vedotin in Monkey Plasma
2023|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Biotherapeutics & Biosimilars Assessing Protein and Payload Stability of Antibody Drug Conjugate Brentuximab Vedotin in Monkey Plasma Using Agilent AssayMAP Bravo and Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS Systems Authors Xi Qiu and Kenda L.J. Evans Agilent Technologies, Inc.…
Klíčová slova
payload, payloadbrentuximab, brentuximabsurrogate, surrogatepeptide, peptidevvsvltvlhqdwlngk, vvsvltvlhqdwlngkassaymap, assaymapmonkey, monkeybravo, bravolba, lbavedotin, vedotinadc, adcquantitative, quantitativeworkflow, workflowtrastuzumab, trastuzumabdrug
Characterization of Antibody‑Drug Conjugates Using 2D-LC and Native MS
2021|Agilent Technologies|Aplikace
Application Note Biopharma/Pharma Characterization of Antibody‑Drug Conjugates Using 2D-LC and Native MS Authors David L. Wong and Sarah M. Stow Agilent Technologies, Inc. Abstract Antibody drug conjugates (ADCs), which comprise a monoclonal antibody (mAb) conjugated to a small molecule drug…
Klíčová slova
dimension, dimensiondar, daradcs, adcsadc, adcsecond, secondnative, nativehic, hicadvancebio, advancebiocounts, countsmab, mabdrug, drugdeconvoluted, deconvolutedfirst, firstconjugated, conjugateddenatured
Determination of Drug-to-Antibody Ratio for Antibody-Drug Conjugates Purified from Serum
2016|Agilent Technologies|Aplikace
Determination of Drug-to-Antibody Ratio for Antibody-Drug Conjugates Purified from Serum Using Automated Affinity Purification, LC/MS analysis, and Novel DAR Calculation Software Application Note Authors Introduction Jing Chen, Michael Bovee, and Antibody-drug conjugates (ADCs) are an emerging class of biotherapeutics designed…
Klíčová slova
adc, adcaffinity, affinityserum, serumdar, darpurified, purifiedassaymap, assaymapadcs, adcsdeconvoluted, deconvolutedcounts, countspurification, purificationbravo, bravocartridges, cartridgescommercially, commerciallyantigen, antigencopurified
