A New Kind of Amide free Polymer for Simplified, Improved SPE

Význam tématu

Ve farmacii a klinickém výzkumu je spolehlivé stanovení léčiv v biologických matricích, jako je lidská plazma, klíčové pro farmakokinetické studie a kontrolu kvality. Pevná fáze extrakce (SPE) patří mezi nejpoužívanější postupy pro selektivní separaci analy­tů od matrice. Vývoj nových sorbentů s vylepšenou schopností vyloučit proteiny a lipofilní interferenty výrazně zlepšuje citlivost a reprodukovatelnost bioanalytických metod.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo ověřit výkon nové amido­volné vodou smáčitelné SPE fáze Bond Elut Plexa (Agilent) při extrakci modelových β-blokátorů metoprololu a propranololu z lidské plazmy. Studie porovnávala Plexa s tradičními polymerními sorbenty z hlediska výtěžností, čistoty extraktu a vlivu matrice na ionizaci (ion suppression). Byla nastavena obecná metoda, která má pokrýt široké spektrum analytů s rozdílným pKa a log P.

Použitá metodika a instrumentace

Protokol SPE s Bond Elut Plexa:

• Pretreatment: vzorek 100 µL human plasma naředěný 1:3 vodou/200 mM NH4Ac pH 10
• Kondicionace: 150 µL metanolu, 150 µL vody
• Naložení vzorku: analyty v jádře polymerního zrna
• Promývání: 2×150 µL vody/methanolu (95:5)
• Eluce: 2×100 µL čistého metanolu
• Evaporace do sucha, rekonstituce v 100 µL mobilní fáze

Chromatografie a detekce:

• LC: Agilent UHPLC systém s kolonkou Pursuit C18, 3 µm, 2,0×50 mm
• Mobilní fáze: A – 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě, B – methanol
• Gradient: 0–0,5 min 80 % A/20 % B; 0,5–3,0 min 20 % A/80 % B; 3,0–4,5 min 80 % A/20 % B
• Injekční objem: 10 µL, doba běhu 4,5 min
• MS: ESI v pozitivním módu, kolizní plyn Argon, přechody MRM pro metoprolol 268,2→116,0 a propranolol 260,0→116,0

Hlavní výsledky a diskuse

Bond Elut Plexa dosáhla absolutních výtěžností nad 90 % pro oba analyty při porovnání s mobilní fází. Ve srovnání s tradičním polymerem se výtěžnosti při extrakci planktonické plazmy zvýšily z 53–59 % na 81–98 %. Ion suppression testy ukázaly minimální útlum signálu na materiálu Plexa v porovnání s konkurenčním sorbentem. Propranolol, který tradičně silně koelu­uje s proteiny a trpí potlačením signálu, vykázal při použití Plexa významné zlepšení citlivosti.

Přínosy a praktické využití metody

Sorbent Bond Elut Plexa umožňuje:

• Efektivní odstranění proteinů a lipofilik
• Vysokou a reprodukovatelnou výtěžnost širokého spektra farmaceuticky relevantních látek
• Zkrácení doby vývoje metod díky univerzálnímu protokolu
• Zvýšení citlivosti LC-MS analýzy díky sníženému ion suppression

Budoucí trendy a možnosti využití

Vývoj SPE sorbentů s vylepšenou hydrofilní porézní strukturou směřuje k integraci do automatizovaných vysokoprůtokových platforem a UPLC-MS metod s krátkou dobou analýzy. Potenciál Plexa se otevírá i pro kvantifikaci biologických markerů, metabolitů či environmentálních kontaminantů v komplexních matricích.

Závěr

Bond Elut Plexa představuje pokročilý SPE sorbent, který významně zlepšuje čistotu extraktů, výtěžnost a spolehlivost bioanalytických metod LC-MS. Díky univerzálnosti protokolu a sníženému útlumu signálu otevírá nové možnosti pro rychlé a přesné stanovení léčiv v plazmě.