Extraction of Benzodiazepines in Urine with Polymeric SPE Cation Exchange, Agilent Bond Elut Plexa PCX

Význam tématu

Analýza benzodiazepinů v moči má zásadní význam ve forenzní toxikologii a klinické diagnostice. Tyto látky jsou široce předepisovány jako anxiolytika a sedativa, přičemž jejich metabolity v moči poskytují klíčové informace o dávkování, užití a možném zneužití.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit vysoce citlivou a reprodukovatelnou metodu kvantifikace 14 benzodiazepinů a jejich metabolitů v lidské moči pomocí polymerní SPE s kationtovou výměnou (Agilent Bond Elut Plexa PCX) následované LC-MS/MS analýzou.

Použitá instrumentace

• Solid-phase extraction: Agilent Bond Elut Plexa PCX 30 mg/3 mL
• Kapalinová chromatografie: Agilent 1290 Infinity, kolona Pursuit XRsUltra 2.8 µm C18 (2.0 × 100 mm)
• Hmotnostní spektrometrie: Agilent 6460 Triple Quadrupole, ESI v negativní polaritě

Použitá metodika

Vzorek 1 mL moče se naředil 1 : 2 v 2% kyselině mravenčí a, je-li nutná hydrolytická konjugace, přidal se b-glukuronidázní roztok a inkubovalo se 2 h při 60 °C. SPE protokol:

• podmínění kazety metanolem a vodou
• naložení vzorku pod nízkým vakuem
• oplach 2% kyselinou mravenčí a 50% methanolem
• eluce 5% amoniaku v methanolu

Suché extrakty se rekonstituovaly v 200 µL 50:50 formiátové kyseliny/methanol.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla meze detekce 1 ng/mL a lineární oblast nad třemi řády koncentrace (1–1000 ng/mL) s korelačními koeficienty >0,995. Procenta obnovy kolísala kolem 100 % s RSD pod 18 % pro nízké i vysoké koncentrace. Ion represi významně snížilo účinné odstraňování proteinu a fosfolipidů díky hydroxy-modifikované povrchové struktuře sorbentu Plexa PCX.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost a selektivita pro spotřební i forenzní laboratoře
• Rychlý a univerzální protokol s minimální optimalizací
• Vysoká propustnost a reprodukovatelnost výsledků při sériových analýzách

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření SPE-MS metodiky na další farmaceutické a toxikologické třídy látek s využitím adaptivních sorbentů. Integrace automatizovaných 96-well formátů a high-resolution MS přinese další zlepšení citlivosti a throughputu.

Závěr

Agilent Bond Elut Plexa PCX SPE spojeno s LC-MS/MS představuje univerzální a spolehlivý postup pro kvantifikaci benzodiazepinů v moči, nabízející vynikající obnovy, nízkou mezeru detekce a vysokou reprodukovatelnost s minimální potřebou metodického ladění.

Reference

• Hudson W, Agilent Technologies Inc. Extraction of Benzodiazepines in Urine with Polymeric SPE Cation Exchange, Agilent Bond Elut Plexa PCX; Application Note SI-01334, 2014