Reduced Ion-suppression in Bioanalysis by Liquid Chromatography Mass Spectrometry Applying Specially Treated Solid Phase Extraction

Význam tématu

Ion-suprese představuje zásadní problém při analýze biologických vzorků pomocí LC–MS, kdy endogenní složky snižují citlivost, přesnost a reprodukovatelnost měření. Minimalizace těchto interferencí je klíčová pro spolehlivé výsledky v bioanalytice.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit účinnost nových hydroxylovaných SPE sorbentů Bond Elut Plexa a Bond Elut Plexa PCX při redukci ion-suprese ve srovnání s konkurenčními produkty. Studie zahrnovala post-column infusion testy, hodnocení limit detekce, návratnosti, opakovatelnosti a linearity kalibračních křivek.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků se využilo SPE s hydroxylovaným povrchem:

• Předúprava: 1:3 ředění plazmy s 2 % NH3 (nebo H3PO4), následované sekvencí MeOH a vody.
• Proplach: vodný roztok modifikovaný MeOH/ACN.
• Eluce: organická směs MeOH:ACN s přídavkem amoniaku.

Post-column infusion testy kombinovaly nepřerušovanou infuzi analytů se vstřiky prázdné plazmy pro monitorování ion-suprese.

Instrumentace:

• Agilent 1260 Infinity LC
• Agilent 6460 Triple Quad MS (ESI+ JetStream)
• Agilent Poroshell 120 EC-C18 kolona (2,1×50 mm, 2,7 µm)

Podmínky LC: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě/MeOH, gradient 10–90 % B za 4 min, průtok 0,4 mL/min.

Hlavní výsledky a diskuse

Hydroxylované sorbenty prokázaly výrazné snížení ion-suprese oproti konkurenci:

• Limit detekce (LOD) a kvantifikace (LOQ) v řádu 0,01–0,05 ng/mL.
• Návratnosti 90–120 % s RSD < 4 % (n=6).
• Linearita kalibračních křivek R2 > 0,995.
• Analýza lipidových stop odhalila nižší úrovně interférencí.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace hydroxylovaných SPE sorbentů přináší:

• Vyšší citlivost a přesnost analýz biologických vzorků.
• Snížené opotřebení a údržbu LC–MS přístrojů.
• Vhodnost pro farmaceutické, klinické a toxikologické aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může zahrnovat:

• Rozšíření povrchových modifikací SPE pro různé typy analytů.
• Integraci s vysokopropustnou automatizací a miniaturizací.
• Optimalizaci pro ultra-senzitivní a vícenásobné detekční platformy.

Závěr

Hydroxylované SPE sorbenty Bond Elut Plexa a PCX významně snižují ion-supresi při LC–MS bioanalýze, poskytují vynikající návratnosti, linearitu i reprodukovatelnost a nabízejí robustní řešení pro náročné biologické aplikace.

Reference

• Agilent application note: 5990-8388EN
• Agilent application note: 5990-8400EN