Molecular Weight Confirmation of a Peptide Using MS Spectral Deconvolution for OpenLab CDS and the Agilent InfinityLab LC/MSD XT System

Význam tématu

Intact mass analysis peptidů pomocí LC/MS s dekonvolucí spekter umožňuje spolehlivé ověření molekulové hmotnosti biopolymérů. Tato metoda je rychlá, robustní a cenově dostupná, což ji činí vhodnou pro biomedicínský výzkum i rutinní QA/QC v laboratořích.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a otestovat workflow pro potvrzení molekulové hmotnosti 42 aminokyselinového peptidu GIP-1. Analýza zahrnovala identifikaci základní a oxidované formy pomocí MS Spectral Deconvolution ve softwaru Agilent OpenLab CDS 2.8.

Použitá metodika

• Chromatografie: Agilent 1290 Infinity II, kolona ZORBAX RRHT StableBond 2.1×50 mm, 1.8 µm, 80 °C.
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě; B: 0,1 % kyseliny mravenčí v acetonitrilu.
• Gradient: 0–5 min na 40 % B, následně návrat na 5 % B v 5.5 min; průtok 0.5 mL/min.
• MS detekce: Agilent InfinityLab LC/MSD XT, ESI v pozitivním módu, teplota 350 °C, scannovací rozsah m/z 400–2000, profilový mód.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II flexibilní pumpa (G7104A)
• Agilent 1290 Infinity II multisampler (G7167B)
• Agilent 1290 Infinity II termostat kolony (G7116B)
• Agilent 1290 Infinity II DAD (G7117B)
• Agilent InfinityLab LC/MSD XT (G6135C) se zdrojem ESI (G1948B)

Hlavní výsledky a diskuse

Intaktní vzorky GIP-1 vykázaly v TIC dva vrcholy při 3.8 a 4.0 min. Dekonvoluce odhalila molární hmotnosti 4982.7 Da (oxidovaná forma) a 4998.7 Da (nemodifikovaný peptid). Forcované oxidování pomocí 2 % H2O2 potvrdilo identitu oxidačního produktu. Automatizovaná reportovací šablona vygenerovala přehlednou PDF zprávu se spektrem, dekonvolučními daty a relativními abundancemi.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé potvrzení molekulové hmotnosti bez potřeby vysoké přesnosti MS.
• Nízká složitost obsluhy a provozní náklady.
• Automatizace reportingu zvyšuje efektivitu a reprodukovatelnost.
• Vhodné pro rutinní kontroly kvality v biotechnologických i farmaceutických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší rozšíření dekonvolučních algoritmů pro identifikaci posttranslačních modifikací, integrace s LIMS a využití umělé inteligence pro automatickou interpretaci komplexních spekter. Vyšší propustnost a cloudové platformy podpoří rozvoj vysokoprocesních laboratoří.

Závěr

Kombinace LC/MSD XT a OpenLab CDS s funkcí MS Spectral Deconvolution umožňuje efektivní a spolehlivou konfirmační analýzu peptidů. Automatizované workflow zvyšuje důvěryhodnost výsledků a zkracuje dobu analýzy, čímž je ideální pro výzkumné i rutinní aplikace.

Reference

• Fast and Simple Protein Molecular Weight Confirmation Using the Agilent InfinityLab LC/MSD XT Mass Selective Detector. Agilent Technologies application note, 5994-0188EN, 2019.
• Critical Quality Attribute Monitoring of mAbs at the Intact and Subunit Levels Using a Cost-Effective, Simple and Robust LC/MS Solution. Agilent Technologies application note, 5994-1349EN, 2019.
• Unit Mass Spectral Deconvolution for Molecular Weight Confirmation of Large Molecules. Agilent Technologies technical note, 5994-6928EN, 2023.