EAS: Liquid Chromatographic Gradient Method Allowances Provided by General Chapter, USP <621> Chromatography

Význam tématu

General Chapter <621> USP Chromatography zavádí harmonizované pokyny pro gradientní metody v kapalinové chromatografii, což umožňuje vyšší flexibilitu parametrů (velikost částic, průtok, sklon gradientu, objem injekce) a současně zachovává shodu s monografickými kritérii. Tento přístup podporuje modernizaci analytických postupů v laboratořích farmacie, potravinářství a doplňků stravy, zkracuje doby analýz a snižuje spotřebu mobilní fáze i vzorků.

Cíle a přehled studie

Autoři implementovali úpravy gradientní metody podle USP <621> na monografii nečistot antivirotika abacavir sulfátu. Hlavním cílem bylo ověřit možnost přechodu z tradiční HPLC kolony (3,9 × 150 mm, 5 µm) na moderní UHPLC platformu (2,1 × 75 mm, 2,5 µm) bez ztráty kritické chromatografické selektivity.

Použitá metodika a instrumentace

Analýza se opírala o přípravu testovací směsi SST dle USP monografie abacavir sulfátu. Pro výpočet parametrů adaptovaných na různé systémy byly využity vzorce pro:

• průtok (flow rate),
• objem injekce,
• čas gradientu,
• dwell volume offset.

Srovnávány byly:

• HPLC platforma 3,9 × 150 mm, 5 µm, dwell volume 1,145 mL (Alliance HPLC),
• UHPLC platforma 2,1 × 75 mm, 2,5 µm, dwell volume 0,073 mL (ACQUITY UPLC).

Nástroje: Empower software, OBD™ Column Calculator pro usnadnění výpočtů.

Hlavní výsledky a diskuse

Relativní časy zadržení (RRT) byly konzistentní napříč oběma platformami s fází L1. Všechny kritické páry dosáhly požadovaného rozlišení podle monografických SST kritérií. Přechod na UHPLC vedl k výraznému zkrácení doby analýzy, nižší spotřebě mobilní fáze a zvýšení počtu vzorků za hodinu.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace USP <621> umožňuje:

• flexibilní přizpůsobení monografických metod moderním LC systémům,
• úsporu času a nákladů na mobilní fázi i vzorky,
• zvýšení laboratorní kapacity a throughput.

Budoucí trendy a možnosti využití

Předpokládá se rozšíření flexibilních gradientních metod na další monografie léčivých látek, širší integrace výpočetních nástrojů a automatizace. Trendem je další miniaturizace sloupků, aplikace zelené chemie a on-line monitorování kvality pomocí pokročilých senzorů.

Závěr

Gradientní metody podle USP <621> poskytují robustní rámec pro modernizaci kapalinové chromatografie. Umožňují přechod na vyspělé LC platformy bez kompromisů v kvalitě separace, přinášejí úspory času i materiálu a zvyšují efektivitu analýz.

Reference

• Layton C.E., Rainville P.D. Achieving Method Modernization with the New Liquid Chromatographic Gradient Allowances Provided by USP General Chapter <621> Chromatography and the Alliance HPLC System, 2023.
• USP General Chapter <621> Chromatography, Official Date: 01-Dec-2022.
• Abacavir Sulfate Monograph, Official Date: 01-May-2020.
• Preparative OBD™ Column Calculator, Waters Technologies Corporation, accessed 15-Jan-2022.