Achieving Method Modernization with the New Liquid Chromatographic Gradient Allowances Provided by USP General Chapter <621> Chromatography and the Alliance™ iS HPLC System

Význam tématu

Modernizace chromatografických metod podle harmonizovaného standardu USP General Chapter <621> umožňuje laboratořím využít moderní kolony a systémy bez nutnosti kompletní reinstrumentace či opětovné validace monografií. Díky zvýšené flexibilitě parametrů lze dosáhnout kratších analytických časů, snížení spotřeby mobilní fáze a objemu injekce při zachování regulačních požadavků.

Cíle a přehled článku

Cílem tohoto Application Note je demonstrovat, jak pomocí nových povolenek pro gradientní metody uvedených ve USP <621> a systému Alliance iS HPLC modernizovat USP monografii pro analýzu nečistot antivirotika abacavir sulfátu. Studie ukazuje, jak upravit dimenze kolon a systémová nastavení tak, aby se dosáhlo stejných kritérií systémové vhodnosti.

Použitá metodika

Pro modernizaci byly vybrány kolony s L1 stacionární fází v rozměrech 4,6 mm x 100/150 mm s částicemi 3,5 µm a 5 µm. Metoda zahrnovala:

• Úpravu průtoku podle zachování lineární rychlosti (rovnice 1).
• Úpravu objemu injekce pro zachování poměru analyzované látky ke kolonovému objemu (rovnice 2).
• Korekci počátku gradientu tak, aby se zachoval poměr sklonu gradientu k objemu kolony (rovnice 3).
• Ověření výpočtů pomocí online nástrojů Waters Column Calculators.

Použitá instrumentace

Analýzy proběhly na systému Alliance iS HPLC vybaveném Tunable UV detektorem a softwarem Empower™ 4. Použité kolony:

• Symmetry C18 3,9 x 150 mm, 5 µm
• Symmetry C18 4,6 x 150 mm, 5 µm
• Symmetry C18 4,6 x 100 mm, 3,5 µm
• XBridge C18 4,6 x 100 mm, 3,5 µm
• XSelect HSS T3 4,6 x 150 mm, 3,5 µm

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny modernizované metody splnily kritérium rozlišení NLT 1,5 u kritické dvojice nečistot abacavir sulfátu. Relativní retenční časy zůstaly konzistentní pro kolony se stejnou stacionární fází, zatímco u odlišných stacionárních fází se RRT mírně lišily. Závěry potvrzují, že povolenky gradientu dle USP <621> umožňují přechod na moderní kolony bez ztráty kvality separace.

Přínosy a praktické využití metody

Modernizovaná metoda přináší:

• Zkrácení doby analýzy
• Snížení spotřeby organické mobilní fáze
• Nižší objem vzorku na injekci
• Využití systémů s vyššími provozními tlaky (až 10 000 psi)
• Minimální úpravy validované monografie bez potřeby nové validace

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším směrem je aplikace harmonizovaných povolenek USP <621> pro další monografie, rozšíření využití UHPLC technologií s ještě vyššími tlaky, integrace pokročilých detektorů a vyžití automatizovaných nástrojů pro výpočet a optimalizaci metod, včetně podpory umělé inteligence.

Závěr

Kombinace povolenek pro gradientní metody dle USP General Chapter <621> a systému Alliance iS HPLC umožňuje modernizaci kolony i HPLC systému pro analýzu nečistot abacavir sulfátu. Metoda zachovává systémová kritéria vhodnosti, přináší úsporu času, chemikálií i vzorku a nepřináší nutnost plné revalidace.

Reference

1. General Chapter <621> Chromatography. Official Date: 01-Dec-2022. United States Pharmacopeia.
2. Abacavir Sulfate Monograph, Official Date: 01-May-2020. United States Pharmacopeia-NF.
3. Preparative OBD Column Calculator. Waters Corporation, accessed 06-Jan-2023.
4. Columns Calculator 2.0. Waters Corporation, accessed 06-Jan-2023.