Peak Shape (Why it matters and how to get good peak shape)

Význam tématu

Dobrý tvar chromatografické špičky, definovaný symetrií či Gaussovským průběhem, je zásadní pro:

• Maximální rozlišení mezi analyty
• Vysokou citlivost a přesnost kvantifikace
• Dlouhou životnost chromatografických kolon

Cíle a přehled studie

Tento přehled si klade za cíl vysvětlit:

• Metody měření tvaru špiček (USP tailing factor, asymetrie, počet desek)
• Hlavní problémy s tvarováním (tailing, fronting, broaden, split)
• Faktory ovlivňující tvar špiček a návody k jejich optimalizaci

Použitá metodika a instrumentace

Měření probíhalo pomocí standardních parametrů:

• USP tailing factor při 5 % výšky špičky
• Asymetrie při 10 % výšky špičky
• Výpočet počtu desek (N) a šířky špičky na poloviční výšku
• Van Deemterova křivka pro určení optimální lineární rychlosti

Klíčová instrumentace:

• Kapalinové chromatografy Agilent 1260 Infinity II, 1200/6410 LC/MS/MS
• Detektory DAD a MS s různými objemy průtokových komůrek (5 µl, 13 µl)
• Kolony Agilent Poroshell 120 (HPH-C18, CS-C18), ZORBAX (Extend-C18, StableBond, Eclipse Plus)
• Inertní kapiláry a spojky InfinityLab QuickConnect/QuickTurn

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza odhalila klíčové příčiny problémů s tvarem špiček:

• Interakce volných silanolů na povrchu křemeliny – řešeno endkupací a vysokou čistotou křemeliny
• Zdroj pH a složení mobilní fáze – optimální 20–50 mM pufrů, přidání TEA/TFA
• Extracolumnitní objemy – nevhodné kapiláry a spojky vedou k broaden či split
• Teplota a viskozita mobilní fáze
• Komplexace kovově citlivých analytů – bioinertní systémy, pasivace a deaktivační aditiva

Přínosy a praktické využití metody

Důsledná kontrola tvaru špiček přináší:

• Vyšší kvalitu kvantitativních dat v QA/QC a výzkumu
• Rychlejší analýzy díky vyšší účinnosti a možnosti vyšších průtoků
• Úsporu nákladů na častou výměnu kolon

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směřování oboru zahrnuje:

• Vývoj povrchově porézních a hybridních částic pro ještě vyšší účinnost
• Šíření bioinertních LC systémů a additiv pro kovově citlivé aplikace
• Online automatizované čištění vzorků (SPE, SLE, inline filtrace)
• Využití aditiv s minimálním vlivem na MS detekci

Závěr

Optimální tvar chromatografických špiček vyžaduje integrovaný přístup: výběr vhodné kolony, mobilní fáze, systémových komponent a pravidelnou údržbu pro spolehlivé a reprodukovatelné výsledky.

Reference

Původní text neobsahoval explicitní literární odkazy.