Sensitive UHPLC-UV determination of anthocyanins using innovative active eluent pre-heating technology

Význam tématu

Anthokyany jsou významnou skupinou flavonoidů odpovědných za červené, modré a fialové zbarvení ovoce a květů. Díky svým antioxidačním vlastnostem jsou předmětem zájmu v oblasti potravinářství, farmacie i environmentálních studií. Rychlá a reprodukovatelná analýza těchto sloučenin je klíčová pro kontrolu kvality, vývoj nutraceutik a sledování biologické aktivity v potravinářských produktech.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo předvést bezproblémový přenos UHPLC‐UV metody pro separaci šesti běžných anthokyanů z Thermo Scientific UltiMate 3000 systému na nový Vanquish Flex systém. Klíčové parametry hodnocené při přenosu byly přesnost retenčních časů, šířka píků a variabilita integračních ploch při plné srovnatelnosti chromatografických podmínek.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla využita reverzní fázová kolona Acclaim 120 C18 RSLC (2,2 µm, 150 × 2,1 mm). Mobilní fáze sestávala z vody a acetonitrilu, obojí obsahovalo 0,1 % kyseliny mravenčí, v gradientním režimu. Průtok činil 0,475 mL/min, teplota kolony 30 °C a detekce UV při 540 nm. Vzorky s koncentrací 10 µg/mL každého anthokyanu byly injikovány objemem 0,5 µL.

Instrumentace

• UltiMate 3000 UHPLC: LPG-3400RS pumpa, WPS-3000TRS autosampler, TCC-3000RS kolona, DAD-3000RS detektor
• Vanquish Flex UHPLC: Quaternary Pump F, Split Sampler FT, Column Compartment H, Active Pre-heater, DAD HL detektor
• Kolona: Acclaim 120 C18 RSLC, 2,2 µm, 150 × 2,1 mm

Hlavní výsledky a diskuse

Obě UHPLC soustavy dosáhly baseline rozlišení šesti anthokyanů do čtyř minut. Průměrné retenční časy z 25 opakovaných injekcí byly prakticky identické a nepotřebovaly úpravu gradientu ani objemu míchání fází. Aktivní předehřívání eluční fáze u Vanquish Flex významně snížilo relativní rozptyl (RSD) retenčních časů i šířky píků ve srovnání s UltiMate 3000 systémem. Pokles RSD o 20–50 % potvrdil lepší termickou stabilitu a konzistenci separace pod vysokým tlakem.

Přínosy a praktické využití metody

• Minimalizace nákladů a času na revalidaci při přechodu mezi UHPLC systémy
• Vysoká reprodukovatelnost retenčních časů a šířky píků díky aktivnímu předehřívání
• Spolehlivá analýza anthokyanů v potravinách, nápojích a nutraceutikách

Budoucí trendy a možnosti využití

Využití aktivního předehřívání lze rozšířit i na další termálně citlivé separace a vysoce viskózní eluenty. Další směřování zahrnuje integraci hmotnostní detekce ke zlepšení citlivosti a selektivity a adaptaci metody pro online monitorování kvality potravin a farmaceutických produktů.

Závěr

Studie prokázala úspěšný přenos UHPLC‐UV metody pro analýzu anthokyanů mezi dvěma generacemi systémů bez úprav chromatografických podmínek. Aktivní předehřívání eluční fáze na Vanquish Flex zásadně zvýšilo přesnost a reprodukovatelnost měření, čímž poskytuje robustní řešení pro rutinní analýzy v různých odvětvích analytické chemie.