Increasing Resolution and Speed by Operating UHPLC Columns up to 1200 Bar

Význam tématu

UHPLC s částicemi pod 2 µm nabízí výrazně vyšší produktivitu a rozlišení než konvenční HPLC a je klíčovým nástrojem při analýze složitých vzorků.
Využití tlaků až do 1200 bar umožňuje plně využít potenciál jak kratších, tak delších kolon a dosáhnout vyšších průtoků i lepší selektivity.

Cíle a přehled studie / článku

Technická poznámka popisuje využití kolon Agilent ZORBAX RRHD s částicemi 1.8 µm v kombinaci se 1290 Infinity LC systémem, který nabízí maximální tlak 1200 bar.
Cílem je ukázat, jak vysokotlaký provoz umožňuje zkrátit doby analýzy, zvýšit rozlišení směsí a zvýšit kapacitu analýz.
Studie obsahuje příklady separace složitých vzorků, porovnání rychlostí a rozlišení při různých délkách sloupců a konfiguracích.

Použitá metodika a instrumentace

Základní vybavení:

• Kapalinová chromatografie Agilent 1290 Infinity LC (max. tlak 1200 bar)
• Kolony ZORBAX RRHD 1.8 µm: Eclipse Plus C18 2.1×50 mm; SB-C18 2.1×100 mm a 150 mm; tandemové zapojení
• Mobilní fáze: voda s 0.02–0.1 % kyselinou fosforečnou nebo mravenčí a organická fáze acetonitril/methanol
• Detekce UV: vlnové délky 255–280 nm
• Průtoky 0.4–1.6 mL/min, teplota 25–45 °C

Hlavní výsledky a diskuse

Klíčové poznatky ze tří příkladů:

• Příklad 1 – rychlá gradientní separace 10 antioxidantů za méně než 2 min při průtoku 1.6 mL/min a tlaku až 1070 bar
• Příklad 2 – tandemové kolony (150+100 mm) zvýšily rozlišení o 36 % a účinnost o 60 % při tlaku ≈1095 bar
• Příklad 3 – prodloužení délky kolony na 150 mm zvýšilo kapacitu od ~486 do ~589 bodů při tlaku ~768 bar pro extrakt z lékořice

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší:

• Výrazné zkrácení doby analýzy a zvýšení propustnosti laboratoře
• Vysoké rozlišení složitých vzorků
• Flexibilitu volby délky kolony a průtoku
• Robustnost a reprodukovatelnost při vysokých tlacích

Budoucí trendy a možnosti využití

Perspektivní směry rozvoje:

• Nové materiály a povrchové úpravy kolonek pro extrémní tlaky
• Integrovaná hyphenace s hmotnostní spektrometrií pro metabolomiku a proteomiku
• Automatizace a vysokopropustné aplikace v průmyslové QC
• Vývoj selektivních fází pro cílené separace

Závěr

Agilent ZORBAX RRHD kolony s částicemi 1.8 µm a 1290 Infinity LC systém poskytují provoz až do 1200 bar, což umožňuje optimalizovat rychlost, rozlišení a kapacitu UHPLC analýz. Tento přístup rozšiřuje analytické možnosti a zvyšuje efektivitu laboratoří.

Reference

• Agilent Technologies. Increasing Resolution and Speed by Operating UHPLC Columns up to 1200 Bar. Technical Note 5990-4552EN, 2009.