Analysis of Radix Bupleuri (Chaihu) using Agilent 1200 Series LC Systems with Evaporative Light Scattering Detector

Význam tématu

Chaihu (Radix Bupleuri) je významnou složkou tradiční čínské medicíny, využívanou při léčbě horečky, zánětlivých onemocnění a virových infekcí. Hlavní účinné látky, saikosaponiny, vyžadují spolehlivou analýzu pro ověření kvality suroviny, původu a konzistence farmaceutických přípravků. Kombinace chromatografických technik s univerzální ELSD a UV detekcí umožňuje komplexní fingerprinting a kvantifikaci látek, což je zásadní pro QA/QC a standardizaci TCM.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a porovnat konvenční HPLC a Rapid Resolution LC (RRLC) metody pro analýzu šesti klíčových saikosaponinů v Radix Bupleuri z různých zdrojů. Studie optimalizovala podmínky ELSD, zkrátila dobu analýzy a prokázala rozdíly ve fingerprint chromatogramech mezi odrůdami Chaihu.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky sušených kořenů Bupleurum byly extrahovány methanolem s přídavkem pyridinu, ultrazvukově promývány a filtrací. Pro separaci sloučenin byly optimalizovány dva chromatografické režimy:

• Konvenční HPLC: ZORBAX SB C18 (4,6×250 mm, 5 µm), gradient 30→100 % acetonitrilu ve vodě během 60 min, průtok 1,0 mL/min, detekce UV (210 nm, 248 nm) a ELSD (40 °C, 55 psi).
• RRLC: ZORBAX SB C18 (3×50 mm, 1,8 µm), gradient 30→100 % acetonitrilu během 6 min, průtok 0,8 mL/min, objem injekce 2 µL, stejné detektory.

Použitá instrumentace

• Agilent 1200 Series Binary Pump SL s Vacuum Degasser
• Agilent 1200 Series High-performance Autosampler SL
• Agilent 1200 Series Thermostatted Column Compartment SL
• Agilent 1200 Series Diode Array Detector SL (micro flow cell)
• Agilent 1200 Series Evaporative Light Scattering Detector (standard nebulizer)
• Agilent ChemStation software rev. B.03.02

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace teploty (40 °C) a tlaku dusíku (55 psi) pro ELSD vedla k maximální citlivosti pro saikosaponiny. Konvenční HPLC nabídl kvalitní separaci během 70 min, ale baseline UV detektoru vykazovala drift při gradientu. RRLC snižuje dobu analýzy na 15 min, zachovává ekvivalentní účinnost a zvyšuje propustnost pětinásobně. Fingerprint chromatogramy ukázaly odlišné peak profile mezi odrůdami Beichaihu, Nanchaihu a méně obvyklými druhy (např. B. bicaule), přičemž ELSD a UV detekce se vzájemně doplňují.

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácení analýzního času a snížení nákladů díky RRLC bez ztráty rozlišení.
• Spolehlivá fingerprint identifikace původu Chaihu na základě kombinace ELSD a UV profilů.
• Kvantitativní stanovení šesti saikosaponinů s adekvátní lineárností a opakovatelností metodiky.
• Využití v rutině QA/QC farmaceutické výroby a výzkumu tradičních medicin.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj by mohl zahrnovat rozšíření databáze fingerprintů pro strojové učení a chemometrické metody, integraci LC-MS pro strukturální identifikaci neznámých peaků a miniaturizaci systémů pro vyšší propustnost. Také je perspektivní zpřesnit detekční limity a aplikovat metody na komplexní formulace obsahující Chaihu.

Závěr

Agilent 1200 RRLC se ELSD představuje efektivní přístup pro rychlou a robustní analýzu saikosaponinů v Radix Bupleuri. Kombinace UV a ELSD detekce zajišťuje úplnou fingerprintingovou charakterizaci a umožňuje spolehlivou identifikaci původu i kvantifikaci hlavních bioaktivních složek.

Reference

1. China Pharmacopeia Commission. China Pharmacopeia. People’s Medical Publishing House, 2005.
2. Xiao R. et al., Chin. J. Pharm. Anal. 26(2), 162–167 (2006).
3. Zhang H. et al., Chin. J. Pharm. Anal. 27(8), 1150–1153 (2007).
4. Liau B. C. et al., J. Pharm. Biomed. Anal. 43, 1174–1178 (2007).