Real time library search for the confident annotation of metabolites on Thermo Ascend Tribrid instrument

Význam tématu

Confidentní anotace metabolitů je základem pro přeměnu nestrukturovaných dat z neselektivních metabolomických analýz na biologicky významné informace.
V oblasti neřízené metabolomiky představuje vysoce přesná masová spektrometrie (HRAM MSn) a automatizované nástroje pro vyhledávání knihoven (Real Time Library Search, RTLS) klíč k rychlé a spolehlivé identifikaci známých i příbuzných neznámých sloučenin.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout cílený hluboký scan pro specifické třídy sloučenin, zejména flavonoidů, využitím kvalitní ručně kurátorské HRAM MSn knihovny ve spojení s RTLS.
Experimenty se zaměřily na extrakty z různých druhů čaje a porovnání výsledků získaných s aktivním RTLS a bez něj.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika:

• Příprava vzorků: extrakce zeleného, černého a bylinného čaje horkou vodou, příprava blank a QC vzorků.
• Chromatografie: Vanquish Horizon UHPLC, kolona Accucore Vanquish C18+ 2,1×150 mm, 1,5 μm.
• MS analýza: Orbitrap Ascend Tribrid, cyklus 1,2 s pro MS1 a MS2, sběr MSn (3–5) pomocí vestavěných šablon.
• RTLS: šablona Met-MIQ pro vyhledávání v mzVault 2.3 knihovně a triggery pro MS3.
• Zpracování dat: Mass Frontier 8.0, Compound Discoverer 3.3, Arita Flavonoid Database.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Horizon
• Kolona: Thermo Scientific Accucore Vanquish C18+
• MS: Thermo Scientific Orbitrap Ascend Tribrid
• Software: Mass Frontier 8.0, Compound Discoverer 3.3, mzVault 2.3

Hlavní výsledky a diskuse

• RTLS zvýšilo počet detekovaných flavonoidů téměř o 100 v porovnání s nativní akvizicí.
• Optimalizované nastavení šablon minimalizovalo zbytečné MS3 skeny a umožnilo více MS2 analýz neflavonoidních metabolitů.
• Pomocí analyzátorů a softwarových filtrů bylo možné vyhodnotit relativní rozdíly mezi vzorky čaje a podpořit biologickou interpretaci.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená efektivita a spolehlivost v cílené identifikaci metabolitů specifické třídy.
• Umožnění hloubkové analýzy komplexních biologických matic s minimálním opakováním datových akvizic.
• Využití v QA/QC a výzkumu pro rychlou screeningovou aplikaci.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření RTLS knihoven na další třídy metabolitů.
• Integrace s inteligentními akvizičními režimy (AcquireX, AI-driven sběr dat).
• Automatizace procesu curation a dynamické aktualizace knihoven.

Závěr

Workflow využívající RTLS a vysoce kurátorskou HRAM MSn knihovnu významně zlepšuje schopnost anotace cílených metabolitů v komplexních vzorcích, čímž podporuje rychlejší a přesnější interpretaci biologických dat.

Reference

• –