race Level Quantitation of 8 Nitrosamines Including Varenicline Nitroso-Drug Substance Related Impurity (VNDSRI) in Varenicline Tablets Using LCMS-8045

Význam tématu

Vareniclin je klíčová léčiva pro odvykání kouření, jejíž kvalita a bezpečnost je závislá na kontrole možných nitrosaminových nečistot. Mezi tyto patří i Varenicline Nitroso-Drug Substance Related Impurity (VNDSRI), vzhledem k mutagennímu potenciálu nitrosaminů je nutné monitorovat jejich hladiny na stopové úrovni pod limity stanovenými regulačními úřady.

Cíle a přehled studie / článku

Studie popisuje vývoj a validaci rychlé a citlivé kvantitativní metody LC-MS/MS pro simultánní stanovení osmi nitrosaminů včetně VNDSRI ve formě tablet vareniclinu. Hlavním cílem bylo dosáhnout limitu kvantitace (LOQ) nižšího než požaduje metoda US FDA a umožnit spolehlivé sledování těchto nečistot v hotových léčivých formách.

Použitá metodika

Pro extrakci z tablet se vzorky vážily, promíchaly s vodoformiakovým roztokem včetně interních standardů, sonikovaly a centrifugovaly. Následovalo filtrování 0,22 μm stříkačkovým filtrem a přímá LC-MS/MS analýza.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Nexera X3 (Shimadzu)
• Kolona Shim-pack GIST C18, 150 × 4,6 mm, 5 μm, 40 °C
• Mobilní fáze A: 0,1 % kyselina mravenčí ve vodě, B: 0,1 % kyselina mravenčí v methanolu; gradient 10–70 % B v 1–9 min, 70–90 % B v 9–10 min, 90 % B do 12 min; průtok 0,7 mL/min
• Injektovaný objem: 25 μL, odvádění API do odpadu ventilem v počáteční fázi
• Hmotnostní spektrometr LCMS-8045, APCI zdroj: rozstřik 3 L/min, sušení 5 L/min, DL 200 °C, Interface 350 °C, Heater Block 200 °C
• MRM přechody pro 8 nitrosaminů a 2 interní standardy

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala LOQ pro VNDSRI, NDEA a NEIPA již na 0,1 ppb, pro NMBA, NDIPA, NDPA a NDBA na 0,2 ppb a pro nejcitlivější NDMA na 0,5 ppb. Kalibrační křivky měly koeficienty determinace r2 ≥ 0,998. S/N při LOQ se pohybovalo mezi 13 a 62. V analyzovaných vzorcích vareniclinových tablet byla detekovaná koncentrace VNDSRI 16,83 ppm, ostatní nitrosaminy byly pod LOQ. Placebové vzorky neobsahovaly žádnou ze sledovaných nečistot. Recovery testy na třech úrovních (0,2; 0,5; 1,0 ppb) ukázaly hodnoty mezi 70 a 130 %.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá a robustní analýza osmi nitrosaminů v jediné LC-MS/MS injekci
• Velmi nízké LOQ pro spolehlivou kontrolu obsahu pod limity regulačních norem
• Vhodné pro rutinní QA/QC laboratoře a farmaceutické výzkumné projekty

Budoucí trendy a možnosti využití

Další optimalizace by mohla zahrnovat automatizované vzorkovací systémy a zvýšení přímé citlivosti pomocí nových zdrojů ionizace či vysokorozlišující hmotové spektrometrie. Rozšíření metodiky na další nitrosaminy a suroviny v různých léčivých formách zvýší komplexnost a přehlednost kontroly bezpečnosti léčiv.

Závěr

Vyvinutá metoda na systému Nexera X3 s LCMS-8045 poskytuje rychlou, citlivou a reprodukovatelnou analýzu osmi nitrosaminů včetně VNDSRI ve formě tablet vareniclinu. Splňuje požadavky FDA na limity kvantitace a umožňuje spolehlivou kontrolu kvality hotových léčivých forem.

Reference

• Tupe D., Suryawanshi N., Sutar P., Ghadi S., Shukla N., Patil S., Patil N., Kelkar J., Rasam P. Trace Level Quantitation of 8 Nitrosamines Including Varenicline Nitroso-Drug Substance Related Impurity (VNDSRI) in Varenicline Tablets Using LCMS-8045. Shimadzu Analytical (India) Pvt. Ltd., 2022.