Targeted Lipidomic Analysis of Pediatric Leukemia Cells Using LC-MS/MS Triple Quadrupole

Význam tématu

Lipidová analýza je nezbytná pro pochopení role lipidů v nádorových procesech, zejména u pediatrické leukemie, kde heterogenita buněčných populací a rezistence leukemických kmenových buněk komplikuje léčbu. Cílená lipidomika umožňuje detailní kvantifikaci stovek lipidových druhů, což podporuje identifikaci biomarkerů a vývoj nových terapeutických strategií.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na vytvoření a validaci rychlého a citlivého workflow pro cílenou lipidomiku pomocí LC-MS/MS s triple kvadrupólem. Analyzovaly se buňky kostní dřeně od pediatrických pacientů v diagnóze a při relapsu s cílem kvantifikovat změny lipidových profilů a identifikovat potenciální biomarkery relapsu.

Použitá metodika a instrumentace

Sample preparation zahrnovala centrifugaci buněčného pelu, extrakci 75% ledově chlazeným methanolem se směsí 97 izotopově označených interních standardů, homogenizaci keramickými kuličkami a extrakci směsí acetonitril:isopropanol:aceton v poměru 1:1:1. Chromatograficky byla aplikována 16minutová RP metoda na Agilent 1290 Infinity II Bio LC s Deactivator Additive pro zlepšení tvaru píků. Detekce probíhala na Agilent 6495 Triple Quadrupole v režimu dynamického MRM s Agilent Jet Stream ESI v pozitivním a negativním módu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila identifikaci a kvantifikaci více než 1200 lipidů ve 54 podtřídách, včetně glycerofosfolipidů, sphingolipidů, triacylglycerolů a sterolů. Validace potvrdila lineární rozsah (r2 > 0,95), LOQ 0,01–0,5 µg/mL, přesnost s korekcí 50–150 % a opakovatelnost CV ≤ 30 %. Extrahovaná matrice kalibrace kompenzovala matriční efekty i ztráty při extrakci, což vedlo k nápravě recovery > 90 %.

Přínosy a praktické využití metody

Navržený workflow nabízí rychlou a robustní analýzu komplexních lipidomů z buněčných vzorků s vysokou citlivostí a přesností. Metoda je vhodná pro rozsáhlé studie biomarkerů, farmakologický vývoj i monitorování účinnosti léčebných zásahů u leukemie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším krokem je aplikace metody na kohortu 200 vzorků od pacientů s relapsem a bez relapsu za účelem identifikace lipidových prediktorů relapsu. Perspektivní je také integrace lipidomiky s multiomickými přístupy a automatizovaná analýza dat pro urychlení objevování biomarkerů.

Závěr

Vyvinutá cílená LC-MS/MS metoda byla úspěšně validována pro detailní profilování lipidomů pediatrické leukemie. Výsledky podporují její využití ve výzkumu mechanismů onemocnění, identifikaci biomarkerů a vývoji personalizovaných léčebných strategií.

Reference

• Huynh K a kol. A Comprehensive, Curated, High-Throughput Method for the Detailed Analysis of the Plasma Lipidome. Agilent Application Note 5994-3747EN, 2021