Ion Chromatography Assay for Chloride and Sulfate in Adenosine

Význam tématu

Adenosin je důležitá léčivá látka, u níž mohou aniontové nečistoty jako chlorid a sulfát ovlivnit kvalitu a bezpečnost přípravku. Současné monografické metody USP pro stanovení těchto aniontů využívají turbidimetrické srážkové zkoušky se stříbrnými a barnatými solemi, které jsou subjektivní, pracné, využívají toxické činidla a vytvářejí nebezpečný odpad. Rychlá a objektivní analýza pomocí iontové chromatografie (IC) může tyto nevýhody odstranit a umožnit citlivé, přesné a reprodukovatelné stanovení chloridu a sulfátu v adenosinu.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou, robustní a citlivou metodu iontové chromatografie pro simultánní stanovení chloridu a sulfátu v adenosinu, která splňuje požadavky USP monografie a nahradí dosavadní turbidimetrické testy. Práce demonstruje optimalizaci separačních podmínek, validaci analytických parametrů a posouzení robustness metody.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci a detekci aniontů byl použit systém Thermo Scientific Dionex ICS-5000+ HPIC vybaven:

• SP/DP pumpou pro vysokotlakou IC
• eluentovým generátorem EGC 500 (KOH cartridge)
• samosamplérem AS-AP
• elektrolyticky regenerovaným potlačovačem ERS 500 v recyklačním režimu
• vodivostním detektorem CD a chromatografickým softwarem Chromeleon

Separační kolony: Dionex IonPac AG18-4 µm guard (4×30 mm) a AS18-4 µm analytická (4×150 mm). Eluent: isokratický KOH 28 mM (standardní) nebo 40 mM (rychlý režim). Průtok: 0,8 mL/min (standardně) nebo 1,5 mL/min (vysokotlaký mód). Teplota kolony 30 °C, objem injekce 10 µL, potlačovač 56 mA (standard) či 110 mA (HPIC).
Vzorky: 0,2 g adenosinu suspendované ve 10 mL vody, krátce promíchané a filtrované. Standardní roztoky chloridu a sulfátu připraveny gravimetrickou ředicí technikou z komerčního 1000 mg/L standardu.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace separace na AS18-4 µm koloniích ukázala: při 28 mM KOH a 0,8 mL/min bylo chlorid elutován za 3,6 min, sulfát za 5,9 min (celkem 8 min). Zvýšení KOH na 40 mM zkrátilo analýzu na 5 min. V režimu HPIC (40 mM, 1,5 mL/min) se doba snížila na 3,5 min (chlorid 1,69 min, sulfát 2,09 min). Vrcholové asymetrie kolem 1,2 a rozlišení nad 3,6 potvrzují vysokou účinnost. Naměřené koncentrace chloridu (0,06 mg/L) a sulfátu (0,10 mg/L) byly pod limity USP (1,4 a 4 mg/L).
Metoda byla validována:

• Linearity: 0,2–5 mg/L chloridu (R² = 0,9992), 0,1–20 mg/L sulfátu (R² = 0,9999).
• Preciznost: opakovatelnost retence RT RSD < 0,2 %, plocha RSD < 2 %.
• Přesnost: recoveries 96–104 % při třídenním testu spikovaných vzorků.
• Citlivost: LOD/LOQ chlorid 0,005/0,02 mg/L, sulfát 0,013/0,04 mg/L.
• Robustnost: malé odchylky eluentové koncentrace (±2 mM), průtoku (±10 %), teploty (±2 °C) a sloupce neovlivnily kvalitu separace.

Přínosy a praktické využití metody

Nová IC metoda nabízí objektivní a vysoce průchodné stanovování chloridu a sulfátu v adenosinu bez použití toxických srážecích činidel a bez produkce nebezpečného odpadu. Automatické eluentové generátory a regenerované potlačovače minimalizují přípravu a zvyšují pracovní efektivitu. Metoda zcela vyhovuje požadavkům USP a může být snadno implementována v kvalitativních a kvantitativních farmaceutických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Iontová chromatografie ve vysokotlakém režimu bude i nadále rozšiřovat své využití pro rutinní farmaceutické kontroly. Očekávají se další zkrácení doby analýzy, integrace s hmotnostní spektrometrií, miniaturizace a plná automatizace přípravy eluenty. Metoda lze adaptovat na stanovení dalších farmaceutických nečistot a aniontů v různých matricích.

Závěr

Systém Dionex ICS-5000+ HPIC ve spojení s kolonou AS18-4 µm poskytuje rychlou, robustní a citlivou metodu pro stanovení chloridu a sulfátu v adenosinu. Analytické parametry (linearity, preciznost, přesnost, citlivost a robustnost) splňují doporučení USP General Chapter <1225>. Metoda je vhodnou alternativou k dosavadním turbidimetrickým testům USP.

Reference

1. Adenosine 2079. U.S. Pharmacopeial Convention (USP); Rockville, MD, USP35-NF30.
2. Validation of Compendial Procedures, General Chapter <1225>. U.S. Pharmacopeia/National Formulary; Rockville, MD, 2012; pp 877–881.