Ion Chromatography Assay for Ammonia in Adenosine

Význam tématu

Adenosin je klíčová purinová nukleosidová sloučenina s významným terapeutickým využitím v kardiologii, léčbě bolestí a plicní hypertenze.
Nečistota amoniaku v přípravcích adenosinu ovlivňuje kvalitu i bezpečnost léčiv a je proto nutné ji citlivě a spolehlivě detekovat.

Cíle a přehled studie / článku

Studie představuje vývoj a validaci iontově chromatografické metody pro stanovení amoniaku v adenosinu.
Cílem bylo nahradit dosavadní barvicí postup s rtuťnatým činidlem, který je subjektivní, nebezpečný a generuje nebezpečný odpad.
Metoda měla splňovat limity uvedené v monografii USP (<4 mg/L NH₃) a nabídnout vyšší přesnost, citlivost a bezpečnost.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá isokratickou iontovou chromatografii se supresní vodivostní detekcí.
Parametry separace:

• Kolonová souprava: Dionex IonPac CG12A-5 µm guard (3×30 mm) a CS12A-5 µm analytická (3×150 mm).
• Eluent: 33 mM methansulfonové kyseliny generované elektrodialýzou (EGC III MSA).
• Průtok: 0,7 mL/min, teplota kolony i detektoru: 30 °C.
• Injekční objem: 10 µL.
• Detekce: Dionex CSRS 300 nebo SC-CSRS 300 supresor v autosupresním režimu, 68 mA.
• Vybavení: Thermo Scientific Dionex ICS-5000+ RFIC HPIC systém, AS-AP autosampler, Chromeleon software, CR-CTC trap columna.

Hlavní výsledky a diskuse

Separační systém dosahuje eluce amonného iontu za ~2,1 min s rozlišením ≥2 vůči sodíku a asymetrií ~1,2.
Celkový čas analýzy je 5 min, což podporuje vysokou průchodnost vzorků.
Detekční limit (LOD) a kvantitační limit (LOQ) jsou 0,001 a 0,004 mg/L, podstatně pod požadovaným limitem 4 mg/L.
Lineární odezva mezi 0,025 a 2 mg/L (r²=0,9984), široký rozsah 0,025–10 mg/L vyžaduje kvadratickou kalibraci (r²=0,9992).
Přesnost (RSD ret. časy <0,1 %, RSD plochy <2 %) a přesnost stanovování obnov 88–116 % (nízké a vysoké koncentrace) splňují pokyny ICH a USP.
Robustnost metody byla ověřena změnami teploty, průtoku a koncentrace elučního činidla a ukázala konzistentní výsledky včetně rozlišení a asymetrie píků.

Přínosy a praktické využití metody

Nová IC metoda minimalizuje expozici rtuťnatým činidlům, snižuje množství nebezpečného odpadu a odstraňuje subjektivní hodnocení barvy.
Zajišťuje vysokou citlivost, krátký analýzní čas a snadnou automatizaci v rutinní farmaceutické kontrole kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na stanovení dalších amonných či jiných nízkomolekulárních nečistot v biotechnologiích a farmaceutické produkci.
Očekává se integrace s hmotnostní spektrometrií, miniaturizace systémů a přechod k plně bezodpadovým technologiím.
Dalšími směry jsou online monitorování fermentačních procesů a přenos metody do přímo vestavěných kontrolních linek.

Závěr

Vyvinutá iontově chromatografická metoda pro stanovení amoniaku v adenosinu splňuje farmaceutické požadavky na citlivost, přesnost a spolehlivost.
Díky rychlé analýze, eliminaci toxických činidel a robustnímu provozu představuje vhodnou alternativu k tradičním barvocitlivým testům.

Reference

1. U.S. Pharmacopeial Convention. Adenosine monograph. USP35–NF30 Erata, Rockville, MD.
2. International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Q2(R1) Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology, 2005.
3. U.S. Pharmacopeia/National Formulary. General Chapter <1225> Validation of Compendial Methods, 2012.
4. Hinshaw J.V., Dolan J.W. Stimuli to the Revision Process: Signal-to-Noise Measurements from Chromatographic Data. Pharmacopeial Forum, 2012, 38(3).