A Comprehensive Method for the Analysis of Pain Management Drugs and Drugs of Abuse Incorporating Simplified, Rapid Mixed-Mode SPE with UPLC-MS/MS for Forensic Toxicology

Význam tématu

Rychlá a spolehlivá analýza léčiv proti bolesti a látek zneužívaných v klinických a forenzních laboratořích je klíčová pro správné monitorování pacientů i pro soudní důkazy.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout metodiku pro extrakci a kvantifikaci 80 analýz v moči spojující smíšeně nábojově-vázané SPE a UPLC-MS/MS. Metoda zkracuje přípravu vzorků, minimalizuje manuální kroky a umožňuje analýzu za čtyři minuty při zachování vysoké citlivosti a selektivity.

Použitá instrumentace

• SPE: Oasis MCX µElution Plate (Waters)
• UPLC: ACQUITY UPLC I-Class se sloupcem BEH C18, 1,7 µm, 2,1 × 100 mm
• MS/MS: Waters Xevo TQ-S micro se StepWave a XDR detektorem
• Software: MassLynx a TargetLynx XS

Metodika

Vzorky moči (100 µl) se enzymaticky hydrolizovaly, přenesly na Oasis MCX µElution desku bez kondicionace, omyly a eluovaly do 50:50 ACN:MeOH s 5 % NH3. Před UPLC-MS/MS analýzou byly vzorky naředěny injekčním pufrem. Chromatografie probíhala gradientem 0,1 % HCOOH v H2O/ACN při 0,6 ml/min a 40 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

• Obnova téměř všech analýtů přes 70 % s %CV pod 10 % napříč šesti matrice močí.
• Matrix efekty byly účinně kompenzovány vnitřními standardy (75/78 korigovaných < 20 %).
• Široký dynamický rozsah umožnil kvantifikaci 6-MAM od 2 ng/ml až po methamphetamin 2500 ng/ml.
• Analýza 80 sloučenin s udržením baseline separace kritických párů za 4 minuty.

Přínosy a praktické využití metody

• Snížení rizika chyb přenosu vzorků díky provedení všech kroků v jedné SPE desce.
• Konsolidace metod pro rozsáhlé panely analýz a úspora laboratorního času.
• Přesnost a přesnost měření splňují požadavky klinického výzkumu (bias < 15 %, %CV < 15 %).

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelů o nové syntetické drogy a jejich metabolity.
• Automatizace přípravy vzorků pro zvýšení propustnosti a reproducibility.
• Integrace s on-site screeningovými systémy pro rychlé detekce na místě odběru.

Závěr

Navržená metoda kombinuje zjednodušenou SPE přípravu, rychlou UPLC separaci a vysoce citlivou detekci MS/MS, čímž poskytuje robustní, rychlou a spolehlivou kvantifikaci rozsáhlého panelu analgetik a látek zneužívaných vhodnou pro forenzní i klinický výzkum.

Reference

• 1. Zhang X., Danaceau J.P., Chambers E.: LC-MS/MS analýza THC a metabolitů v krvi. Waters Application Note 2016.
• 2. Danaceau J.P., Chambers E.: LC-MS/MS analýza benzodiazepinů a Z-drog v moči. Waters Application Note 2017.
• 3. Bansal S., DeStefano A.: Klíčové prvky bioanalytické validace metod pro malé molekuly. The AAPS Journal 2007.