UHPLC Separation of Nine Corticosteroids in Under Four Minutes

Význam tématu

Corticosteroidy jsou steroidní hormony s klíčovou rolí v léčbě zánětů, alergií a autoimunitních onemocnění. Rychlá a spolehlivá analytická metoda pro jejich simultánní separaci je nezbytná pro farmaceutický výzkum, klinickou diagnostiku i kontrolu kvality.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní UHPLC metodu pro simultánní separaci devíti běžně používaných kortikosteroidů v čase kratším než 4 minuty. Testovány byly různé formáty kolony (5 µm, 3 µm a 2,2 µm částice) a optimalizovány podmínky mobilní fáze, teploty a objemů injekcí.

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC systém Dionex UltiMate 3000 RSLC se SRD-3600 degaserem a DGP-3600RS pumpou
• WPS-3000RS Split-Loop sampler (100 µL), TCC-3000RS termostatovaná kolona
• DAD-3000RS diodový detektor se semi-analytickou (5 µL) a semi-mikro (2,5 µL) flow buňkou
• Kolony Acclaim 120 C18: 5 µm (4,6 × 250 mm), 3 µm (4,6 × 150 mm); Acclaim RSLC 120 C18: 2,2 µm (2,1 × 100 mm)
• Mobilní fáze ve formě tercionárního gradientu vody, tetrahydrofuranu a methanolu
• Teplota kolony 40–50 °C, průtok 0,75–1,5 mL/min, injekční objemy 5–50 µL

Hlavní výsledky a diskuse

• Na koloně 5 µm (4,6 × 250 mm) při 40 °C bylo separováno sedm z devíti steroidů, prednisolon s kortisonem koelutovaly.
• Zvýšení teploty na 50 °C a nasazení kolony 3 µm (4,6 × 150 mm) s předkolonovým ohřevem zajistilo kompletní rozlišení všech devíti sloučenin.
• Nejrychlejší separace (<4 min) proběhla na RSLC koloně 2,2 µm (2,1 × 100 mm) bez potřeby předkolonového ohřevu, při tlaku 8500 psi.
• Ve všech formátech dosáhly hodnoty rozlišení (USP) >1,5 a asymetrie píků mezi 1,03–1,31; spotřeba mobilní fáze i doba analýzy byly významně sníženy.

Přínosy a praktické využití metody

Vyvinutá UHPLC metoda nabízí vysokou rychlost, reprodukovatelnost a úsporu mobilní fáze, což ji činí ideální pro rutinní analýzy ve farmaceutických laboratořích, klinické diagnostice a QA/QC odděleních.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další miniaturizace a přechod na nano-LC systémy pro snížení spotřeby vzorků a reagencií
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro vyšší selektivitu a senzitivitu
• Optimalizace mobilní fáze ve smyslu zelené chemie a snížení organických rozpouštědel
• Automatizace přípravy vzorků a online vzorkovače pro vysokokapacitní analýzy

Závěr

Studie úspěšně představuje rychlou, robustní a vysoce výkonnou UHPLC metodu pro separaci devíti kortikosteroidů s minimální spotřebou času a mobilní fáze, přičemž nedochází ke zhoršení analytických parametrů.

Reference

Application Brief 123, Dionex Corporation, 2016