Quantification of Anions in Pharmaceuticals

Význam tématu

Farmaceutické přípravky obsahují kromě aktivních látek i složky nechromoforické povahy, které nelze detekovat běžnou UV spektroskopií. Potlačená konduktometrie v kombinaci s kapalinovou iontovou chromatografií umožňuje citlivé stanovení aniontů v komplexních maticích, což je zásadní pro ověření kvality, bezpečnosti a souladu s regulačními požadavky.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat selektivitu a výkonnost dvou aniontových sloupců IonPac AS14 (isokratická metoda) a AS11 (hydroxidový gradient) s potlačenou konduktometrickou detekcí. Jako modelové vzorky byly zvoleny dva volně prodejné léky – tlumič kašle a multisymptomatická cold/flu medicína – obsahující směs anorganických i organických aniontů.

Použitá instrumentace

• Dionex DX-500 systém
• GP40 Gradient Pump s odplyňovací jednotkou
• CD20 Conductivity Detector nebo ED40 Electrochemical Detector
• LC20/LC25/LC30 Chromatografické moduly a peletkové pece
• AS3500 Autosampler
• PeakNet Chromatography Workstation

Použitá metodika

Pro kolonu AS14 se aplikovala isokratická eluce 3,5 mM Na₂CO₃/0,8 mM NaHCO₃ při průtoku 1,2 mL/min. Kolona AS11 byla provozována gradientem NaOH (0,5–38 mM) při 2,0 mL/min. Objem injekce činil 10 µL, detekce se prováděla v režimu AutoSuppression recyklačním systémem ASRS.

Hlavní výsledky a diskuse

• Selektivita: AS14 rychle (do 14 min) separovala anorganické anionty (F^–, Acetát, Cl^–, NO₃^–, PO₄^3–, SO₄^2–), organické anionty však neeluovala. AS11 metodou gradientu rozlišila současně anorganické i organické (benzoát, citrát, sacharin).
• Detekční limity: v rozsahu 30–400 µg/L pro anorganické a 200–2000 µg/L pro organické anionty při S/N = 3.
• Linearita: r² ≥ 0,997 pro většinu analyzovaných aniontů přes více než dva řády koncentrace.
• Přesnost: RSD oblasti < 0,5 % (vzorky 10-násobné ředění), retence < 0,2 %.
• Návratnost: stanovení bromidu a chloridu odpovídalo deklarovaným hodnotám aktivních látek s návratností 98–109 %.
• Vedlejší anionty: detekce stopových kontaminantů (fosfát, sulfát) i neznámých vedlejších píků.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje rychlý a spolehlivý screening farmaceutických formulací na obsah aniontů, slouží jako ortogonální ověření aktivních složek a umožňuje sledování stopových kontaminantů bez interferencí neiontových složek.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Aplikace na širší spektrum lékových forem a excipientů.
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro potvrzovací analýzu.
• Optimalizace gradientních a organických modifikací elučních systémů pro zkrácení doby analýzy a snížení detekčních limitů.

Závěr

Kolona IonPac AS11 v kombinaci s potlačenou konduktometrií nabízí univerzální řešení pro současné stanovení anorganických i organických aniontů v jednu analýzu. AS14 je vhodná pro rychlou isokratickou separaci anorganických aniontů. Obě metody prokázaly vysokou citlivost, linearitu, přesnost a návratnost, což je činí vhodnými pro rutinní kontrolu kvality a výzkum.

Reference

• US FDA CFR Title 21, Part 211.22, 211.160 a 211.165.
• Dionex Corporation, Application Note 106 „Ion Chromatography in the Pharmaceutical Industry“.
• Rabin S.; Stillian J.R.; Barreto V.; Friedman K.; Toofan M. J. Chromatogr. 1993, 640, 97–109.
• Dionex Corporation, Application Note 117 „Quantification of Carbohydrates and Glycols in Pharmaceuticals“.
• Dionex Corporation, Application Note 115 „Determination of Trifluoroacetic Acid (TFA) in Peptides“.