Tips to Help Maximize Resolution

Význam tématu

Rychlá a vysoce účinná kapalinová chromatografie je nezbytná pro oddělení složitých vzorků v průmyslových, farmaceutických a výzkumných laboratořích. Optimalizace rozlišení zajišťuje spolehlivou detekci a kvantifikaci blízce příbuzných látek.

Cíle a přehled studie

Prezentace načrtává systematický plán vývoje metod pro maximalizaci rozlišení v obrácené fázi. Klíčové kroky zahrnují výběr vhodného typu a velikosti částic, volbu chemie stacionární fáze, mobilní fáze a zkrácení doby analýzy. Důraz je kladen na flexibilitu a rutinní přenositelnost do různých LC systémů Agilent.

Použitá metodika a instrumentace

• Technika: obrácená fáze kapalinové chromatografie s gradientem (5–95 % organické fáze)
• Stacionární fáze: C18, zejména superficially porous částice (Poroshell 120, SPP)
• Velikosti částic: 1,9 µm, 2,7 µm a 4 µm
• Kolony: Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18, InfinityLab Poroshell 120
• Přístroje: Agilent 1100/1260/1290 Infinity LC systémy, DAD detektor (254 nm, referenční 360 nm)
• Mobilní fáze: voda s formiátovým pufrem pH 2,7 až 10, acetonitril nebo methanol
• Připojovací elementy: InfinityLab Quick Connect a Quick Turn fitting

Hlavní výsledky a diskuse

• SPP částice Poroshell 120 dosahují až 120 % účinnosti oproti sub-2 µm částicím při nižším tlaku
• Menší objem propojení (<0,2 mm id) významně snižuje disperzi a zúžení šířky píků, zvyšuje rozlišení ze 0,96 na 1,90
• Volba chemie C18 kolon (EC-C18, SB-C18, HPH-C18, CS-C18) mění selektivitu a optimalizuje separaci ionizovatelných látek podle pH
• Minimalizace gradientového objemu (dwell volume) a nastavení pumpy (binární vs. kvaternární) zkracuje dobu vyrovnání a zlepšuje reprodukovatelnost gradientu
• Optimalizované nastavení DAD (referenční signál, šířka pásma, frekvence dat) zajišťuje přesné měření úzkých píků u UHPLC

Přínosy a praktické využití metody

• Zrychlení vývoje metod díky kratším kolonám a menším částicím
• Úspora organických rozpouštědel při použití užších vnitřních průměrů kapilár
• Robustní analýzy díky systematické přípravě mobilní fáze, kontrole reproducibility a správnému skladování kolon
• Jednoduchý přenos metod mezi různými typy Agilent LC systémů

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další optimalizace SPP materiálů a rozšíření nabídky chemie stacionárních fází pro širší třídu sloučenin
• Integrace pokročilých softwarových nástrojů pro automatizaci vývoje metod a predikci rozlišení
• Využití UHPLC pro rychlé vysokoprocesní aplikace s vysokou citlivostí
• Modularita komponent LC systémů pro rychlé přizpůsobení jednotlivým analytickým úlohám

Závěr

Kombinace vhodných kolon s povrchovými částicemi, správného nastavení mobilní fáze, minimalizace objemů systému a optimalizace detektorových parametrů umožňuje dosáhnout vysokého rozlišení a reprodukovatelnosti v RP-LC metodách. Modularita a konzistence Agilent InfinityLab portfolia podporuje efektivní přenos a škálování metod.

Reference

• Powell M., Tips to Help Maximize Resolution, Agilent Application Note 5990-5572EN, 2022
• Agilent Technologies, InfinityLab Poroshell 120 C18 CS, Application Note 5994-2358EN, 2022
• Agilent Technologies, Mobile Phase Preparation Effects, Application Note 5994-2274EN, 2022
• Agilent Technologies, Data Rate and DAD Optimization, Application Note 5991-7560EN, 2022
• Agilent Technologies, Mobile Phase Mixing Impact, Application Note 5988-6476EN, 2022