Sample Preparation for HPLC

Význam tématu

Příprava vzorku před chromatografickou analýzou je zásadní pro spolehlivé, přesné a reprodukovatelné výsledky. Odstranění nežádoucích částic, bílkovin, fosfolipidů či jiných interferencí z komplexních matic výrazně zlepšuje citlivost, robustnost a životnost analytického systému.

Cíle a přehled prezentace

Prezentace objasňuje definici pojmu sample preparation, motivaci k jejímu provádění, přehled používaných technik a bližší popis vybraných produktů na trhu. Hlavními body jsou:

• Definice přípravy vzorku
• Důvody pro přípravu vzorku
• Přehled dostupných metod
• Detailní pohled na vybrané technologie

Použitá metodika a instrumentace

V prezentaci byly zmíněny následující techniky přípravy vzorku:

• Filtrace membránami (PTFE, PES, nylon apod.)
• Centrifugace a precipitace bílkovin
• Liquid–liquid extraction a Supported Liquid Extraction (SLE)
• Solid Phase Extraction (SPE) s různými sorbenty (reverzní fáze, ion-exchange, HILIC)
• QuEChERS pro extrakci z pevných matric

Prezentované produkty Thermo Scientific:

• SOLA SPE cartriges a 96-well plný destičkový formát
• SOLAµ SPE destičky s nízkou kapacitou sorbentu (2 mg) a elucí do 25 µl
• PPT filtrační destičky pro proteinovou precipitaci
• SLE cartriges pro automatizovanou kapalně-kapalnou extrakci

Hlavní výsledky a diskuse

Filtrací lze rychle odstranit pevné částice, klíčová je kompatibilita membrány se vzorkem. Při přípravě pevných vzorků (potraviny, půda) se často kombinuje homogenizace s QuEChERS nebo SPE, aby se dosáhlo čistého extraktu. Proteinová precipitace je jednoduchá, ale poskytuje méně čistý vzorek než LLE/SLE nebo SPE. SPE pak umožňuje cílené čištění na základě afinity analyty vůči sorbentu.

Reprodukčnost: SPE vykazuje nižší variabilitu signálu oproti proteinové precipitaci. Pro odstranění ion-suprese jsou nejúčinnější ion-exchange SPE sorbenty. Integrované frity v SOLA cartriges zajišťují jednotné plnění a stabilitu během přepravy.

Optimalizace SPE zahrnuje volbu sorbentu, adekvátní kondicionaci, složení a objem elučního roztoku. Eluční profily se získávají postupným nárůstem podílu organického odpouštědla a pomáhají nastavit optimální parametry.

Přínosy a praktické využití metody

Příprava vzorku s vhodnou technikou výrazně:

• Zlepšuje detekční limity a citlivost metody
• Snižuje chromatografické a hmotnostně spektrometrické interferenc e
• Zkracuje dobu analýzy a zvyšuje propustnost laboratoře
• Prodlužuje životnost kolony a detektoru

Budoucí trendy a možnosti využití

Roste poptávka po miniaturizovaných, plně automatizovaných a vysoce reprodukovatelných platformách s minimální spotřebou rozpouštědel. Směřuje se k integraci přípravy vzorku přímo do analytických toků (on-line SPE), dále k využití zelených solventů a nových sorbentů pro selektivnější extrakci.

Závěr

Kvalitní příprava vzorku je nezbytnou součástí HPLC analýzy. Volba vhodné techniky (SPE, SLE, QuEChERS, PPT) a optimalizace parametrů výrazně zlepšují přesnost, reprodukovatelnost i výkonnost metody.

Reference

Žádné uvedené literární zdroje.