Determination of six nitrosamine impurities in angiotensin II receptor blocker drugs by LC-MS/MS

Význam tématu

Detekce nitrosaminových nečistot v lécích ARB je zásadní z důvodu jejich prokázaného karcinogenního účinku. V roce 2018 byly ve vzorcích valsartanu odhaleny nitrosaminy NDMA a NDEA, což vedlo k rozsáhlým stažením léčiv z trhu a nedostatkům. Spolehlivá a citlivá analýza těchto sloučenin je proto klíčová pro zajištění kvality, bezpečnosti pacientů a souladu s regulačními požadavky.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem studie bylo vyvinout a validovat jednorázovou LC-MS/MS metodu schopnou současného stanovení šesti nitrosaminů (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA, NMBA) v surovině a tabletách valsartanu na úrovni sub-ppm. Metoda měla překonat limity stávajících GC/MS postupů a rozšířit analytické možnosti o NMBA, která nebyla dosud rutinně sledována.

Použitá metodika

Analýza probíhala na reverzně fázové C18 kolóně s gradientním eluačním programem formic acid/water a formic acid/methanol. Detekce byla realizována vysoce selektivním režimem SRM (selected reaction monitoring) na třístupňovém kvadrupólu. Kvantifikace se opírala o srovnání ploch špiček vzorků se standardními roztoky.

Použitá instrumentace

• Vanquish Flex UHPLC systém
• TSQ Quantis Triple Quadrupole MS (APCI zdroj)
• C18 kolona Solid core F5 2,6 μm
• Titan3 PVDF 0,2 μm stříkačkové filtry

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla LOQ v rozmezí 0,0025–0,01 ppm vzhledem k 100 mg/ml vzorku, tedy 3–10× citlivější než požadavky USFDA. Linearity byla potvrzena pro koncentrace 0,25–100 ng/ml (NDMA, NMBA 1–100 ng/ml) s koeficientem R2 > 0,99. Preciznost (RSD) spolehlivě zůstala pod 5 % při LOQ a systémová zdatnost splnila kritéria (<10 % RSD, srazné přetížení blanku <5 %). Recovery ve zkouškách při 0,03 ppm dosahovala 86–103 % pro všechny analyty.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednotná analýza šesti nitrosaminů v jediném běhu
• Vysoká citlivost a selektivita vhodná pro QA/QC ve farmaceutickém průmyslu
• Rychlá příprava vzorku bez náročných derivatizačních kroků
• Možnost rozšíření na další ARB léčiva

Budoucí trendy a možnosti využití

S růstem regulačních nároků lze metodu adaptovat pro další farmaceutické substance a klinické vzorky. Integrace vysokorychlostních UHPLC systémů s HRMS by mohla dále zvýšit citlivost pod úrovně desítek ppt. Automatizace přípravy vzorků a použití více paralelních kolón odstraní úzká místa v kapacitě analýzy.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda poskytuje robustní, rychlý a citlivý postup pro simultánní stanovení šesti karcinogenních nitrosaminů v ARB lécích. Splňuje přísné požadavky USFDA a umožňuje efektivní monitoring kvality farmaceutických surovin a hotových přípravků.

Reference

• USFDA method “Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (LC-HRMS) Method for the Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs”
• USFDA method “Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) Method for the Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Solid Dosage Drug Product”