Comparison of Sample Preparation Options for the Extraction of a Panel of Endogenous Steroids from Serum Prior to UHPLC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Steroidi hrají klíčovou roli ve fyziologii, jejich spolehlivá kvantifikace v séru je kritická pro klinickou diagnostiku, farmaceutický výzkum i kontrolu kvality. Precizní příprava vzorku minimalizuje matriční efekty a interferující látky (proteiny, fosfolipidy).

Cíle a přehled studie

Porovnat podporovanou extrakci kapaliny (SLE+) a pevnou fázi (SPE, sorbenty ABN/CX) pro extrakci endogenních steroidů ze séra před UHPLC-MS/MS analýzou. Vyhodnotit obnovu, potlačení iontů, obsah fosfolipidů, linearitu a citlivost metody.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky: lidské sérum obohacené interními standardy.
Postupy přípravy:

• SLE+ na 96dst. ISOLUTE® SLE+ (400 µL vzorku, eluční postup 75:25 EtOAc/hexan nebo čistý EtOAc dle obsahu DHEAS).
• SPE na destičkách EVOLUTE® EXPRESS ABN (10 mg) a CX (10 mg) s optimalizovanými wash kroky (H2O/MeOH) a elučním MeOH.
• Evaporace při 40 °C, rehydratace v 50:50 mobilní fáze A:B.

Použitá instrumentace:

• UHPLC Shimadzu Nexera s kolonou ACE C18 (1,7 µm, 100×2,1 mm).
• Triple kvadrupólový MS Shimadzu 8060 s ESI, režim MRM pro více než 20 steroidů (pozitivní i negativní ionizace).

Hlavní výsledky a diskuse

• SLE+ protokol poskytuje recoveries nad 80 % pro většinu analyzovaných steroidů.
• ABN sorbent vyžaduje wash s 40 % MeOH, CX optimalizován kolem 30 % MeOH.
• Obě metody účinně odstraňují proteiny a fosfolipidy, nižší pozůstatky fosfolipidů byly pozorovány u SLE+.
• Kalibrace 5–5000 pg/mL, koeficienty determinace >0,99, LOQ 5–1000 pg/mL dle analyty.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysokopropustný 96dst. formát vhodný pro klinické a farmaceutické laboratoře.
• Snížené matriční efekty a konzistentní citlivost.
• Robustní kontrola kvality a podpora biomarkerových studií.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu o další metabolity, plná automatizace pro vyšší throughput, vývoj selektivnějších sorbentů. Aplikace v personalizované medicíně, endokrinním výzkumu a dopingu.

Závěr

Vyvinuté SLE+ a SPE protokoly poskytují vysokou obnovu, nízké matriční interferencí a robustní linearitu, ideální pro kvantifikaci endogenních steroidů v séru pomocí UHPLC-MS/MS.

Reference

• Biotage: Comparison of Sample Preparation Options for the Extraction of a Panel of Endogenous Steroids from Serum Prior to UHPLC-MS/MS Analysis, MSACL EU 2018, Salzburg, Austria.