Fully automated LC-MS/MS analysis of anticoagulants using a novel reagent kit

Automatizovaná LC-MS/MS analýza antikoagulancií pomocí reagentního kitu DOSINACO

Význam tématu

Přesné stanovení nových perorálních antikoagulancií je klíčové pro monitorování antikoagulačního účinku a rozhodování v klinické praxi. Metody založené na LC-MS/MS umožňují vysokou selektivitu a citlivost a jsou zásadní pro laboratorní diagnostiku, kontrolu kvality a farmakokinetický výzkum.

Cíle a přehled studie

• Vyvinout a validovat plně automatizovaný workflow pro analýzu devíti antikoagulancií pomocí reagentního kitu DOSINACO
• Ověřit linearitu, přesnost a opakovatelnost metody s použitím referenčních plazmatických kalibrátorů a kontrol
• Integrovat přípravu vzorku s LC-MS/MS analýzou bez nutnosti manuálního zásahu

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky podléhají automatizované proteinové precipitaci, filtraci a přesunu do autosampleru pomocí systému CLAM-2000. Chromatografická separace probíhá na C18 koloně 2,1×50 mm za 5 minut v gradientu metanol–voda s formiátem amonným. Detekce je prováděna na LCMS-8045 v režimu MRM s pozitivní ionizací ESI. Interními standardy jsou stabilně značené izotopy kemicky odpovídajících sloučenin.

Použitá instrumentace

• Automatizovaný systém CLAM-2000 (Shimadzu)
• Chromatografický systém Nexera X2
• Tandemové hmotnostní spektrometr LCMS-8045
• Reagentní kit DOSINACO pro 9 antikoagulancií se stabilně značenými standardy
• C18 kolona 2,1×50 mm, 5 mikronů

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita kalibračních křivek pro koncentrace 10–500 µg/L a 100–5000 µg/L se získala s koeficientem lineární regrese vyšším než 0,998
• Přesnost metody se pohybovala v rozmezí 90,6–108,6 %
• Opakovatelnost vyjádřená CV % byla nižší než 8,5 % pro všechny analyty
• Výkon přístroje umožňuje získat jeden výsledek za 5 minut díky překrytému zpracování vzorků

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšení throughput laboratoře a snížení pracovní zátěže díky plné automatizaci
• Eliminace chyb způsobených manuální manipulací, zajištění konzistentní kvality výsledků
• Možnost rutinního nasazení i pro personál bez pokročilých zkušeností s LC-MS/MS

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit na další skupiny léčiv a metabolitů. Další kroky mohou zahrnovat integraci s laboratorními informačními systémy a rozvoj vzdáleného monitoringu biomarkerů. Zvýšení multiplexity a zkrácení doby analýzy podpoří personalizovanou medicínu a telemedicínské aplikace.

Závěr

Plně automatizovaná LC-MS/MS metoda s využitím kitu DOSINACO integrovaná se systémem CLAM-2000 prokázala vysokou spolehlivost, přesnost a efektivitu při stanovení devíti antikoagulancií. Tento přístup výrazně zrychluje laboratorní workflow a přispívá ke kvalitní péči o pacienty.

Reference

• Baumgarten Sigrid, Dayot Fanny, Hoeffler Jean-Francois Fully automated LC-MS/MS analysis of anticoagulants using a novel reagent kit DOSINACO Alsachim SAS Shimadzu Europa GmbH