Simultaneous analysis for Remdesivirand its metabolite [with CLAM-2030]

Význam tématu

Analýza farmakokinetiky remdesiviru a jeho hlavního aktivního metabolitu GS-441524 je zásadní pro optimalizaci léčebných dávek při léčbě virových infekcí, zejména COVID-19. Přesné a citlivé kvantifikace v biologických matricích usnadňují hodnocení účinnosti a bezpečnosti léčby.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout plně automatizovanou metodu pro simultánní stanovení remdesiviru a GS-441524 v plazmě pomocí CLAM-2030 a LCMS-8060. Studie zahrnovala optimalizaci chromatografických podmínek, hmotnostně spektrometrických tranzicí MRM a validaci analytických parametrů (linearity, preciznost, přesnost, stabilita, návratnost a carryover).

Použitá metodika

ul

Vzorky: lidská plazma deproteinovaná acetonitrilem po přidání izotopově značených interních standardů ([13C6]-remdesivir, [13C5]-GS-441524).

Automatizace: CLAM-2030 provádí dávkování, přidání reagenčních látek, míchání a filtraci filtrací přes PTFE membránu.

Chromatografie: kolona Shim-pack Scepter C18-120 (50×2,1 mm, 1,9 µm), gradient 0,05 % kyselina mravenčí ve vodě (A) a 0,05 % v acetonitrilu (B), tok 0,4 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 2 µL s ko-injekcí 20 µL vody pro zlepšení tvaru píků.

MS/MS: ESI+ režim, MRM tranzice pro kvantifikaci a kvalifikaci stanovených iontů, optimalizované podmínky kolizní energie a předchozí precizace.

Použitá instrumentace

ul

Automatický přípravný systém CLAM-2030

UHPLC Nexera X2

Hmotnostní spektrometr LCMS-8060 (ESI+, MRM)

Hlavní výsledky a diskuse

ul

Linearity: Remdesivir 100–5 000 ng/mL (R² ≥ 0,9986), GS-441524 5–250 ng/mL (R² ≥ 0,9997).

Intra-day preciznost: 0,9–2,0 % (remdesivir), 2,3–3,6 % (GS-441524); přesnost 90,5–106 % a 88,5–91,6 %.

Inter-day preciznost: 0,1–7,2 % a 0,4–7,8 %; přesnost 82,2–107 % a 86,7–92,8 %.

Stabilita: po 100 opakovaných injekcích střední QC vzorku RSD ≤ 3,9 %.

Recovery a matrix efekt: remdesivir ~99,8 % (recovery 98,7 %), GS-441524 matrix ≈84,2 % (recovery 90,8 %).

Carryover: remdesivir v blank ≤ 20 % signálu na LLOQ, GS-441524 nedetekován.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaná metoda zvyšuje reproducibilitu a propustnost analýz, minimalizuje ruční práci a šetří čas laboratoře. Vysoká citlivost a robustnost umožňují sledování farmakokinetiky i v nízkých koncentracích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace přípravy vzorku se uplatní při vývoji a monitorování dalších antivirotik a biologicky aktivních látek. Integrace s pokročilou datovou analýzou a umělou inteligencí může dále zlepšit rozhodování v klinické farmakokinetice a personalizované medicíně.

Závěr

Vyvinutá metoda kombinující CLAM-2030 a LCMS-8060 poskytuje spolehlivé, citlivé a vysoce automatizované řešení pro simultánní kvantifikaci remdesiviru a GS-441524 v plazmě, splňující přísné požadavky validace analytických metod.