Analysis of Polyether Antibiotics in Animal Feeds Using Post-Column Derivatization

Význam tématu

Polyetherové antibiotika jako salinomycinu sodný, monensinu sodný a narasinu jsou klíčovými krmnými aditivy regulovanými japonskými předpisy. Spolehlivá a rychlá analýza těchto látek v krmivech je nezbytná pro zajištění potravinové bezpečnosti, dodržení legislativních požadavků a optimalizaci výrobních procesů v živočišné výrobě.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si klade za cíl demonstrovat kvantitativní stanovení tří polyetherových antibiotik v krmivech pomocí HPLC s post-kolonní derivatizací na přístrojové sestavě Nexera™ lite. Výsledkem má být validovaný, plně automatizovaný postup splňující feed analysis standards japonského ministerstva zemědělství.

Použitá metodika a instrumentace

Použitá chromatografická metoda kombinuje reverzní fází s post-kolonní reakcí s vanilinem za kyselých podmínek (Komarowského reakce) a detekci při 520 nm.

• Vysokotlaký kapalinový chromatograf: Nexera lite
• Pumpy: LC-20Ai (mobilní fáze), LC-40D (reagent), inertní typ pro reakční činidlo
• Odplyňovač: DGU-405
• Reakční box: CRB-40 s regulací teploty a cirkulací vzduchu
• Reakční cívka: 5 m × 0,5 mm I.D., 95 °C
• Kolona: Shim-pack Scepter C18-120 (150 × 4,6 mm, 5 μm)
• Teplota kolony: 40 °C, autosampler SIL-40, back pressure coil, cooling coil
• Detektor: UV-VIS SPD-40V (inertní buňka), λ=520 nm
• Mobilní fáze: voda / methanol / kyselina octová = 60 : 940 : 1 (v/v/v), průtok 0,6 mL/min
• Reakční činidlo: methanol / kyselina sírová / vanilin = 95 : 2 : 3 (v/v/v), průtok 0,6 mL/min

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro SL, MN a NR prokázaly v rozmezí 0,25–25 µg (potency)/mL vynikající linearitu (r2 > 0,999). Opakovatelnost retence i plochy píků (n=6) vykázala %RSD pod 1,1 %. Analýza extraktů kuřecích krmiv při limitní koncentraci 0,5 µg/mL přinesla rozlišení píků >1,9 a výtěžky stanovení 100–104 %, což potvrzuje spolehlivost metody ve složitých matricích.

Přínosy a praktické využití metody

• Zkrácení doby analýzy a předúpravy oproti standardní mikrobiologické metodě (z 16–24 h na cca 20 min)
• Plně automatizovaný režim od startu až po ukončení analýzy
• Široký dynamický rozsah kvantifikace splňující požadavky feed analysis standards
• Minimalizace pracovních zásahů operátora a zvýšení laboratorní efektivity

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření post-kolonních derivatizačních technik pro další skupiny krmivových doplňků a veterinaryních látek. Integrace s LC-MS a online chytrými systémy pro kontrolu kvality nabízí potenciál pro vyšší citlivost, selektivitu a datovou provázanost v reálném čase.

Závěr

Metoda HPLC s post-kolonní derivatizací na platformě Nexera lite umožňuje spolehlivé, rychlé a plně automatizované stanovení tří klíčových polyetherových antibiotik v krmivech. Vysoká linearita, opakovatelnost a přesnost analýzy potvrzují vhodnost metody pro rutinní kontrolu kvality a legislativní monitoring.

Reference

1. Public Notice of the MAFF No. 750 of July 24, 1976: Establishing Feed Additives Based on the Act on Safety Assurance and Quality Improvement of Feed.
2. Feed Analysis Standards, Notice from the Director-General, Food Safety and Consumer Affairs Bureau, MAFF No. 19/14729 of April 1, 2008.
3. Ministerial Ordinance on the Specifications and Standards of Feeds and Feed Additives (Ordinance No. 35 of July 24, 1976).