DEPLOYING EFFICIENT WORKFLOWS FOR PEPTIDE MAPPING WITH LC-UV/MS PLATFORMS

Význam tématu

Peptidové mapování je klíčovou technikou v biotechnologickém a farmaceutickém průmyslu pro detailní charakterizaci proteinových terapeutik. Umožňuje identifikaci a kvantifikaci aminokyselinových modifikací, kontrolu kvality a podporu vývoje procesů od raných fází až po výrobu. Automatizace a vysoká reprodukovatelnost této metody zefektivňují práci v laboratořích a usnadňují přenos metodik mezi pracovišti.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyhodnotit mezi­systémovou a vnitrosystémovou reprodukovatelnost peptidového mapování prováděného na platformě ACQUITY Premier LC-UV/MS s integrovaným softwarem Empower. Dále byla testována výkonnost MaxPeak HPS technologie pro zlepšení tvaru píků a univerzální workflow pro automatizovanou analýzu dat.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu štěpků monoklonálních protilátek (mAb) byla využita platforma ACQUITY Premier Bio Sherlock Mapping (BSM) s následujícími komponentami:

• UHPLC pumpa ACQUITY Premier
• Kolona ACQUITY Premier CSH C18
• UV detektor TUV
• Mass analyzer ACQUITY QDa
• Software Empower pro řízení a zpracování dat

Hlavní výsledky a diskuse

Studie ukázala vynikající reprodukovatelnost retenčních časů ve třech souběžně provozovaných systémech napříč devíti náročnými separačními podmínkami, s průměrnou odchylkou pod 0,1 minuty. Nasazení MaxPeak HPS povrchu vedlo ke snížení tailingu u kyselých peptidů až o 30 %. Automatizovaný postup zpracování dat v Empoweru umožnil rychlé generování srozumitelných přehledů a monitoring změn například při týdenních stresových studiích infliximabu.

Přínosy a praktické využití metody

• Zajištění vysoké konzistence výsledků i za náročných separačních podmínek
• Zrychlení analýzy díky integrovanému softwaru a šablonám pro reporty
• Jednotné workflow použitelné v různých pracovních fázích od vývoje až po QC
• Možnost detailního sledování modifikací bílkovin a kvality terapeutik

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj pokročilých povrchových technologií pro UHPLC kolony, zvyšování citlivosti a selektivity MS detekce a prohlubování automatizace zpracování dat s využitím strojového učení. Integrace cloudových řešení a standardizovaných databází může dále usnadnit sdílení metodik a výsledků mezi laboratořemi.

Závěr

Platforma ACQUITY Premier LC-UV/MS kombinovaná se softwarem Empower poskytuje vysoce reprodukovatelné a efektivní řešení pro peptidové mapování. Technologie MaxPeak HPS zlepšuje chromatografické vlastnosti peptidů a automatizované workflow šetří čas a minimalizuje riziko chyb při zpracování dat.

Reference

1. DeLaney K, Birdsall RE, Yu YQ. High Precision Performance of the ACQUITY Premier System (BSM Configuration) for Reproducible Peptide Mapping. Waters Application Note, 2022 April, 720007593.
2. DeLaney K, Birdsall RE, Yu YQ. Utilizing Empower Software to Streamline and Automate the Detection of Sample-to-Sample Differences within Peptide Maps of Biopharmaceuticals. Waters Application Note, 2022 May, 720007610.