EuroResidue: IMPROVED SPE FOR LC-MS/MS DETERMINATION OF RACTOPAMINE IN PORCINE LIVER

Význam tématu

Stanovení zbytků β-agonistu ractopaminu v játrových vzorcích prasat je z praktického i regulačního hlediska klíčové. Ractopamin je povolen pouze v některých zemích, přičemž hranice tolerance v USA a Kanadě činí 50 respektive 40 µg/kg. V mnoha oblastech je jeho použití zakázáno a vyžaduje se nulová tolerance. Spolehlivá a citlivá analytika v oblasti nízkých koncentrací (pod 0,5 µg/kg) je nutná pro splnění minimálních výkonových požadavků (MMPR) stanovených evropskými referenčními laboratořemi.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo optimalizovat a validovat poloautomatizované vyčištění extraktů z játrových vzorků prasat pomocí desek Oasis MCX v kombinaci s pozitivně tlakovaným zařízením OTTO SPEcialist. Metoda měla zajistit vyšší průchodnost, lepší opakovatelnost a snížení rizika kontaminace ve srovnání s manuálním vakuovým systémem.

Použitá metodika a instrumentace

V metodě byla vzorková extrakce upravena dle AOAC 2011.23 s využitím pozitivního tlaku v OTTO SPEcialist namísto vakuového manifoldu. Čištění probíhalo na 96-welové destičce Oasis MCX (60 mg) podle protokolu:

• Condition: 1 mL methanolu
• Load: 1,62 mL supernatantu
• Wash: 1 mL methanolu
• Elute: 0,8 mL 5 % NH4OH v methanolu

Použitá instrumentace

• LC systém: ACQUITY UPLC I-Class Plus
• Kolona: BEH C18 (2,1 × 100 mm, 1,7 µm)
• Fáze A: 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě; fáze B: methanol
• Objem injekce: 4 µL; teplota kolony: 40 °C
• MS: Xevo TQ-XS, ESI pozitivní mód; přechody MRM m/z 302,2→164,1 (14 eV) a 302,2→121,0 (22 eV)

Hlavní výsledky a diskuse

Byly porovnány výsledky zpracování játrových vzorků o koncentraci 0,1 µg/kg ractopaminu standardním vakuovým přístupem a systémem OTTO SPEcialist s 96-well deskou:

• Průměrné zotavení bylo v obou případech srovnatelné kolem 85 – 95 %
• Opakovatelnost (RSD) byla u OTTO SPEcialist významně lepší (pod 5 %) oproti vakuovému manifoldu (cca 10 %)
• Metoda dosáhla limity detekce pod 0,01 µg/kg a potvrdila spolehlivost analýzy pod MMPR

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší následující výhody:

• Vyšší průchodnost až 96 vzorků najednou
• Snížení rizika křížové kontaminace díky pevné desce a pozitivnímu tlaku
• Zlepšená přesnost a opakovatelnost výsledků
• Úspora nákladů na spotřební materiál a rozpouštědla

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k:

• Automatizaci přípravy vzorků v plně robotizovaných linkách
• Rozšíření metody na další farmakologicky aktivní látky v potravinách živočišného původu
• Integraci s on-line proporcionálními SPE moduly pro zvýšení efektivity

Závěr

Implementace desek Oasis MCX s OTTO SPEcialist pozitivně tlakovaným zařízením poskytuje robustní, citlivou a opakovatelnou metodu pro stanovení ractopaminu v játrových vzorcích prasat. Metoda splňuje požadavky na limity detekce a opakovatelnost stanovené MMPR, zvyšuje laboratorní kapacitu a snižuje provozní náklady.

Reference

Waters Corporation. IMPROVED SPE FOR LC-MS/MS DETERMINATION OF RACTOPAMINE IN PORCINE LIVER. 2022.