Improved SPE for LC-MS Determination of Ractopamine in Porcine and Bovine Liver: The Oasis MCX Method Using Otto SPEcialist

Význam tématu

Beta-agonistický lék ractopamin je využíván pro podporu růstu hospodářských zvířat v USA a Kanadě, jeho rezidua však představují zdravotní riziko. Ve většině zemí EU platí nulová tolerance, export vyžaduje limity pod 0,1 ng/g. Přesné, citlivé a efektivní metody kontrol zaručují bezpečnost potravin a vyhovění regulacím.

Cíle a přehled studie

Cílem studie je popsat rychlou čistící strategii pro extrakty jater prasat a skotu kombinující SPE čištění Oasis MCX 96-jamkovou destičkou na semi-automatickém Otto SPEcialist před kvantifikací UPLC-MS/MS. Metoda umožňuje detekci ractopaminu a jeho glukuronidových metabolitů s limitem detekce 0,1 ng/g.

Použitá metodika a instrumentace

• Trojnásobná methanolická extrakce homogenizovaného vzorku 5 g jater (5 mL methanolu, centrifugace).
• Sloučení extraktů, odpaření methanolu, hydrolýza β-glukuronidázou (65 °C, 2 h).
• SPE čištění pomocí Oasis MCX 96-jamkové destičky: podmínění 1 mL methanolu, nanesení ~1,6 mL extraktu, promytí 1 mL methanolu, eluce 0,8 mL 5% NH4OH v methanolu na Otto SPEcialist.
• UPLC: ACQUITY UPLC I-Class PLUS, BEH C18 1,7 µm (2,1×50 mm), gradient formiát/voda – methanol.
• MS/MS: Xevo TQ-XS, pozitivní ESI-MRM, desolvační teplota 550 °C, MassLynx v4.2.

Hlavní výsledky a diskuse

• Obě SPE metody dosahují vysokých recoveries (~100 %) pro ractopamin při 0,1 ng/g.
• Otto SPEcialist zlepšil opakovatelnost (SD < 50 % oproti manuálnímu postupu) a zvýšil signál/šum, plocha píku vzrostla o 87 %.
• Eliminace kroku filtrace a odpaření šetří čas i spotřební materiál.
• Diverze eluátu do odpadu mimo analytický okno chrání MS proti kontaminaci.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé zpracování 96 vzorků najednou s vyšší průchodností a konzistencí výsledků.
• Snížení rizika křížové kontaminace díky jednorázovým destičkám.
• Úspora nákladů na filtry a centrifugační zkumavky.
• Vysoká citlivost vyhovuje MRL i zemím s nulovou tolerancí.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizovaná SPE zařízení se stanou standardem pro screening veterinárních reziduí v potravinách. Vývoj multitargetových UPLC-MS/MS metod rozšíří přístup ke komplexní analýze dalších zakázaných látek s minimalizací manipulace a vysokou průchodností.

Závěr

Použití Otto SPEcialist s Oasis MCX 96-jamkovou destičkou výrazně zlepšilo čistotu vzorků i citlivost stanovení ractopaminu v jatečních orgánech. Metoda přináší rychlejší a opakovatelné výsledky při nižších nákladech na spotřební materiál a vysoké shodnosti dat.

Reference

• AOAC Official Method 2011.23: Determination and Confirmation of Parent and Total Ractopamine in Bovine, Swine, and Turkey Tissues.