Detection of Glucocorticoid Residues in Animal- derived Food by HPLC-MS/MS

Význam tématu

Glukokortikoidy se běžně používají při léčbě zánětlivých onemocnění hospodářských zvířat a někdy nelegálně ke stimulaci růstu. Rezidua těchto látek v potravinách živočišného původu mohou představovat zdravotní riziko pro spotřebitele, a proto existují přísné limity maximálních reziduí (MRL) stanovené evropskou legislativou a dalšími regulačními orgány. Metody spolehlivé detekce jsou klíčové pro kontrolu bezpečnosti potravin a zajištění souladu s předpisy.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat kapalinově chromatografickou metodu spojenou s tandemovou hmotnostní spektrometrií (HPLC-MS/MS) pro kvantitativní stanovení osmi glukokortikoidů (prednison, prednisolon, hydrokortizon, methylprednisolon, dexamethason, betamethason, beklometason, fludrokortison acetát) v tkáních (játra, svalovina) a produktech živočišného původu (mléko, vejce). Studie demonstruje senzitivitu, selektivitu a reprodukovatelnost metody v souladu s evropskými a čínskými limity MRL.

Použitá metodika a instrumentace

• Extrakce vzorků: dvojí extrakce ethylacetátem a alkalickým roztokem, následné čištění na SPE kolonkách se silikagelovým sorbentem.
• Chromatografie: HPLC systém Thermo Scientific Surveyor, kolonou Hypersil GOLD (150 × 2,1 mm, 5 µm), gradientní eluce vodou s 0,1 % kyselinou mravenčí (fáze A) a acetonitrilem (fáze B), průtok 250 µl/min.
• Hmotnostní spektrometrie: Thermo Scientific TSQ Quantum triple quadrupole s ESI zdrojem v negativním iontovém módu, SRM režim pro kvantitativní a kvalitativní přechody jednotlivých analytů.
• Parametry MS: spray voltage 3500 V, teplota kapiláry 350 °C, tlak kolizního plynu Ar 1,5 mTorr, rozlišení Q1/Q3 0,7 FWHM.

Hlavní výsledky a diskuse

• LOQ dosahují hodnot 0,1 µg/l pro mléko a 0,2 µg/kg pro tkáně, což splňuje nebo převyšuje požadavky na MRL.
• Lineární rozsah byl pro většinu látek 0,2–50 µg/kg (R2 > 0,99), pro některé větší rozsahy až do 200 µg/l, s váženou lineární regresí 1/x.
• Obnova extrakcí se pohybovala mezi 60–110 %, pro všechny analyty byla metoda reprodukovatelná a přesná.
• SRM chromatogramy jasně oddělují všechny analyty bez významných rušivých signálů z matrix.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda je vhodná pro kontrolní laboratoře státních referenčních ústavů, potravinářské inspekce a komerční analýzy QA/QC. Díky vysoké citlivosti a selektivitě umožňuje rychlé a spolehlivé sledování glukokortikoidů v různorodých maticích, zajišťuje ochranu spotřebitele a pomáhá producentům plnit legislativní požadavky.

Budoucí trendy a možnosti využití

V budoucnu lze metodu rozšířit o multiplexní analýzu dalších reziduí (antibiotik, hormonů), zkrácení chromatografických gradientů pro vyšší propustnost, využití vysokorozlišovací MS pro širší spektrum screeningů a aplikaci automatizovaných systémů pro přípravu vzorků.

Závěr

Vyvinutá HPLC-MS/MS metoda pro detekci osmi glukokortikoidů v potravinách živočišného původu prokázala vysokou citlivost, selektivitu i reprodukovatelnost. Splňuje mezinárodní limity MRL a je připravena pro rutinní aplikaci v laboratořích pro kontrolu bezpečnosti potravin.

Reference

• Council Directive 96/22/EC on prohibition of certain substances in stockfarming.
• Commission Regulation (EC) No 508/1999 amending MRL procedures (EC) No 2377/90.
• Commission Regulation (EC) No 2593/1999 further amending MRL lists.
• Commission Regulation (EC) No 2535/2000 updating Annex I of MRL Regulation.
• Commission Regulation (EC) No 77/2002 on additional amendments to MRL limits.