Measurement of Chloramphenicol in Honey Using Automated Sample Preparation with LC-MS/MS

Význam tématu

Chloramfenikol je antibakteriostatikum s potenciálně karcinogenními účinky, zakázané ve všech potravinách živočišného původu včetně medu. Pro ochranu zdraví spotřebitelů a splnění legislativy (EU MRPL 0,3 µg/kg) je nezbytné vyvíjet citlivé, rychlé a reprodukovatelné metody detekce reziduí.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo navrhnout plně automatizovanou přípravu vzorku a rychlou LC-MS/MS analýzu chloramfenikolu v medu s negativní ionizací H-ESI a použitím deuterovaného interního standardu CAP-d5. Metoda kombinuje online extrakci TurboFlow s vysokosenzitivním triple kvadrupolem TSQ Vantage.

Použitá metodika a instrumentace

• Automatizovaná extrakce on-line: Aria TLX-1 s TurboFlow Cyclone polymerní extrakční kolonkou (0,5×50 mm).
• Analytický stupeň: Reverzní fází Hypersil GOLD C18 (3×50 mm, 3 µm), kolona temperována na 30 °C.
• Mobilní fáze: 0,02 % kyselina octová vodní a methanol; gradientní eluce.
• Detekce: TSQ Vantage ve vysokém rozlišení H-SRM, sledované přechody CAP 321→257,152,194 m/z, pro CAP-d5 326→157,262 m/z.
• Software: Aria 1.6.2 pro řízení a LCQUAN 2.5.6/Xcalibur 2.0.7 SP1 pro kvantifikaci.

Hlavní výsledky a diskuse

• Rychlá online extrakce a celkový čas analýzy: 5 minut pro přípravu a 5 minut LC-MS/MS běh.
• Citlivost: LOD 0,023 µg/kg, LLOQ 0,047 µg/kg, lineární kalibrace při r²=0,9944 přes dvě dekády koncentrace.
• Preciznost a přesnost: %CV ≤19 % na LLOQ a ≤8 % u vyšších koncentrací, interní standard RSD <9 %.
• Recovery v matrix 80,9–96,0 % díky korekci CAP-d5 a minimální potlačení signálu.
• Nulová detekce reziduí CAP v pěti testovaných medech z různých zdrojů.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zrychlení přípravy vzorku oproti offline SPE, QuEChERS nebo LLE (5 vs. 35–120 minut).
• Zvýšená průkaznost a reprodukovatelnost díky automatizaci a internímu standardu.
• Vysoká citlivost umožňuje spolehlivé screeningové i potvrzovací testy pod legislativními limity.
• Jednoduchá pretreatment operace: ředění medu vodou bez nutnosti složitých extrakčních kroků.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze dále rozšířit o multiplexní analýzu dalších antibiotik nebo kontaminantů v různých potravinových matricích. Integrace s platformou Aria TLX-4 umožní zvýšit throughput. V budoucnu je možné kombinovat online extrakci s high-resolution MS pro širší spektrum cílových látek.

Závěr

Vyvinutá metoda s online TurboFlow extrakcí a LC-MS/MS detekcí dosahuje vysoké citlivosti a rychlosti analýzy chloramfenikolu v medu. Eliminace časově náročných offline kroků zvyšuje průchod vzorků a snižuje riziko chyb v přípravě. Metoda je plně vyhovující legislativním limitům a vhodná pro rutinní screening a potvrzování přítomnosti CAP v medu.

Reference

1. Commission Decision 2003/18/EC amending Decision 2002/657/EC on MRPLs for residues in food of animal origin, Official Journal of the European Communities, L71 (2003).
2. R. Krell, Value-Added Products from Beekeeping, FAO Agricultural Services Bulletin, FAO 1996.
3. D. Ortelli, P. Edder, C. Corvi, Analysis of Chloramphenicol Residues in Honey by LC-MS/MS, Chromatographia 59 (2004).
4. C. Pan et al., Determination of Chloramphenicol in Honey by Monolithic Column LC-MS After QuEChERS, Acta Chromatographica 17 (2006).
5. L. Rodziewicz, I. Zawadzka, Rapid Determination of Chloramphenicol in Honey by LC-MS/MS and Method Validation, APIACTA 42 (2007).