Extraction of THC-COOH from Urine Using ISOLUTE® HAX Columns

Význam tématu

Metabolit tetrahydrokanabinol-karboxylové kyseliny (THC-COOH) je klíčovým ukazatelem konzumace konopí v toxikologických a forenzních studiích. Spolehlivá extrakce z moči je nezbytná pro přesné stanovení koncentrace, která ovlivňuje důsledná rozhodnutí v medicíně, dopravě nebo zaměstnaneckých testech.

Cíle a přehled studie

Cílem application note IST1035A.V.1 bylo optimalizovat postup extrakce THC-COOH z moči pomocí ISOLUTE HAX kolonek kombinující neméněpolární a aniontovou výměnu. Studie představuje krok za krokem protokol, hodnotí výtěžnost (>75 %) a popisuje následnou analýzu derivátovaného analyzátu metodou GC-MS.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika extrakce:

• Předúprava: Do 3 mL moči se přidá 100 µL vnitřního standardu, hydrolyza 0,1 mL 10 M NaOH při 60 °C/15 min, ochlazení a doplnění 0,5 mL kyseliny octové.
• Podmínění kolonky: 1 mL methanolu při 2 mL/min.
• Vyvážení: 1 mL deionizované vody při 2 mL/min.
• Nanášení vzorku: 2 mL/min.
• Eluce interferencí: 1 mL pufru amonného octanu 0,3 M pH 8 a 1 mL 20 mM amonného octanu, následováno 1 mL methanolu.
• Eluce analyzátu: 1 mL směsi methanol/ethylacetát/kyselina octová (48:50:2) při 1 mL/min.

Instrumentace GC-MS:

• Kolona: DB-5 kapilární 15 m × 0,25 mm × 0,25 µm.
• Teplotní program: start 180 °C (1 min), rampou 20 °C/min do 280 °C (1 min).
• Detekce: hmotnostní spektrometrie s ionizací elektronovým nárazem.

Hlavní výsledky a diskuse

Použití ISOLUTE HAX kolonek umožnilo dosáhnout průměrné výtěžnosti THC-COOH nad 75 % i při vysoké iontové síle matrice. Kombinovaný retenční mechanismus efektivně odstraňuje nežádoucí složky moči, čímž zajišťuje čisté eluáty pro derivatizaci a následnou GC-MS analýzu. Metoda vykazuje vysokou reprodukovatelnost a robustnost.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Rychlou a jednoduchou přípravu vzorku s minimem kroků.
• Vysokou čistotu eluátu s omezeným pozadím v GC-MS chromatogramu.
• Vysokou selektivitu a citlivost pro klinické a forenzní aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další směry vývoje zahrnují automatizaci extrakčního protokolu pro vysokoprůtokové laboratoře, rozšíření aplikace na další metabolity kanabinoidů a integraci s LC-MS/MS technikami pro multiplexní analýzy. Moderní sorbenty s vylepšenou selektivitou by mohly dále zvýšit čistotu a snížit spotřebu organických rozpouštědel.

Závěr

Popsaná metoda extrakce THC-COOH pomocí ISOLUTE HAX kolonek představuje spolehlivý, reprodukovatelný a efektivní postup pro toxikologická stanovení v moči. Jednoduchý protokol s vysokými výtěžnostmi a kvalitní GC-MS analýzou je vhodný pro rutinní i vysoce náročné laboratorní aplikace.