Extraction of THC and Metabolites Including 11-nor-9-carboxy-Δ9-THC Glucuronide from Urine Using ISOLUTE® SLE+ Prior to LC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Analýza delta-9-tetrahydrokanabinolu (THC) a jeho metabolitů v moči je klíčová pro toxikologické testování, forenzní vědy a monitorování léčebné terapie. Spolehlivé, rychlé a reprodukovatelné extrakční postupy minimalizují interferenci matrix a zajišťují přesné stanovení nízkých koncentrací analyzovaných látek.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem tohoto Application Note bylo navrhnout a optimalizovat protokol podporované kapalinné extrakce (ISOLUTE SLE+) pro simultánní izolaci THC, jeho klíčového metabolitu 11-nor-9-karboxy-Δ9-THC a jeho glukuronidovaného derivátu, stejně jako kanabinolu, kanabidiolu a 11-hydroxy-THC ze vzorků moči. Extrakty měly být kompatibilní s následnou kvantitativní analýzou metodou LC-MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Postup přípravy vzorků:

• Vzorek moči se naředil 1:1 roztokem 25 mM dibutylamoniového acetátu, pH přibližně neutrální, a důkladně promíchal.
• Podporovaná kapalinná extrakce proběhla ve dvou formátech: 200 µL SLE+ desky a 1 mL SLE+ kolony.
• Eluce se prováděla etylacetátem, následovalo odpaření a rehydratace ve 200 µL 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě/acetonitrilu (70/30).

Instrumentace:

• LC: Waters ACQUITY UPLC s věžeťem 20 µL, kolona BEH C18 (1,7 µm, 100 × 2,1 mm), isokratický režim 20 % 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě / 80 % 0,1 % kyseliny mravenčí v metanolu, tok 0,4 mL/min, teplota kolony 40 °C.
• MS/MS: Waters Premier XE triple kvadrupól s ESI, zdroj 150 °C, de­solvační teplota 450 °C, MRM přechody optimalizované pro každý analyzát.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytla vysoké výtěže extrakce (>85 %) všech analyzátů a opakovatelnost s RSD <10 %. MRM chromatogramy při koncentraci 40 ng/mL ve vzorcích moči prokázaly dostatečnou selektivitu a citlivost. Optimalizovaná doba adsorpce (5 min) a objemy elučních rozpouštědel minimalizovaly zbytkové znečištění matrix.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda ISOLUTE SLE+ nabízí oproti klasické LLE výrazné zkrácení doby přípravy, eliminaci emulzí a konzistentní výtěžnost. Je vhodná pro forenzní laboratoře, klinickou toxikologii i farmaceutický výzkum, kde je vyžadována vysoká propustnost vzorků a reprodukovatelnost výsledků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace a robotizace přípravy vzorků pro vysokopropustné stanovení.
• Integrace s novými fázovými extrakčními materiály s lepší selektivitou pro polaritu glukuronidů.
• Možnost rozšíření metody o další kanabinoidní metabolity nebo syntetické kanabinoidy.

Závěr

Podporovaná kapalinná extrakce ISOLUTE SLE+ je robustní a efektivní přístup pro izolaci THC a jeho metabolitů z moči. Kombinace rychlého vzorkování, vysoké výtěžnosti a kompatibility s LC-MS/MS umožňuje spolehlivou kvantifikaci v rutinní i výzkumné praxi.

Reference

• Data prezentovaná na společné konferenci TIAFT/SOFT 2011, San Francisco.
• Scheidweiler KB, Desrosiers NA, Huestis MA. Quantification of THC and metabolites in urine by LC-MS/MS. Clin Chim Acta. 2012;413(23-24):1839–1847. doi:10.1016/j.cca.2012.06.034